研究課題
2023年度は(1)HS-AFMによるDNAクランプのスライド観察の検討、(3)PfuHef IDRに存在する当初予想していなかった2つめのDNAクランプ結合モチーフの役割についての検討、(3)SAXSデータに基づくPfuHef IDRとPCNA、DNAの三者複合体構造の再解析を行った。(1)については、観察条件の再検討と、これまでに得られているデータの再解析を行った。結果、十分な観測数ではないものの、Hef IDRによるDNAクランプのスライド抑制を支持する結果が得られた。(2)については2つのDNAクランプ結合モチーフのうち一方に変異を導入して相互作用を解析した。その結果、DNAクランプとの相互作用には一つ目のDNAクランプ結合モチーフが重要であることが示された。(3)については、前年度までに三者複合体のSAXSデータを取得していたものの、2つのDNAクランプ結合モチーフが存在すること等が原因でモデル構築できていなかったものである。(2)の結果を受けて、モデル構築することができた。その結果、これまでに得られているTkoでの三者複合体と同様にIDRのN末端がDNAに結合した構造を取ることが示された。以上の結果と、前年度までの結果を総合すると、Tko、Pfu 2つの生物種について、HefIDRはDNAクランプと結合すると同時に、N末端側でDNAとも結合し、これによりDNAクランプのスライドを抑制するという共通の機能を持つことを明らかにした。当初、TkoとPfuの2つのHefIDRのN末端側には特徴的な二次構造モチーフが保存さていることでDNAと結合できると予想した。しかし、本研究の進展に伴い、そのような二次構造モチーフよりもむしろIDR上の複数の塩基性残基によるDNAとの柔軟な相互作用が重要であることが示唆された。
すべて 2024 2023
すべて 雑誌論文 (3件) (うち国際共著 1件、 査読あり 3件、 オープンアクセス 3件) 学会発表 (3件) (うち国際学会 1件)
Journal of Molecular Biology
巻: 435 ページ: 168189～168189
10.1016/j.jmb.2023.168189
Journal of Biological Chemistry
巻: 299 ページ: 105285～105285
10.1016/j.jbc.2023.105285
Physical Review Research
巻: 5 ページ: -
10.1103/PhysRevResearch.5.043154
