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本研究の目的は、申請者が開発したマイナー酸性糖鎖分析法を血清試料に適用し、膵管腺癌の診断マーカーを探索することである。血清中には、糖タンパク質糖鎖のN-結合型糖鎖やO-型糖鎖に加えて、糖脂質糖鎖が存在する。それらの糖鎖群中のマイナー酸性糖鎖を網羅的に解析し、マーカー候補となりうる糖鎖の特定を試みた。また、マイナー酸性糖タンパク質糖鎖のキャリアタンパク質の特定及び糖分析の高スループット化検討についても実施した。
初年度は、マイナー酸性N-型糖鎖の解析を中心に進め、グルクロン酸化N-型糖鎖や硫酸化N-型糖鎖をマーカー候補糖鎖として特定した。また、マイナー酸性O-型糖鎖分析の前処理法を確立すると共に、膵管腺癌患者血清と健常者血清で硫酸化O-型糖鎖の発現パターンが異なることを明らかにした。
2年目ではマイナー酸性糖鎖のキャリアタンパク質の特定を試みた。しかしながら、標的成分は非常に微量であるため、既存の解析手法では検出が困難であった。そこで新規の解析手法を開発した。血清中のマイナー酸性糖鎖キャリアタンパク質の特定には至らなかったが、確立した技術は新たなマーカー探索技術として有用になると考えられた。
最終年度は、糖脂質糖鎖解析手法の前処理法を開発すると共に、健常者と膵管腺癌患者血清中の糖脂質糖鎖の比較解析を実施した。その結果、グルクロン酸化された糖脂質糖鎖がマーカー候補として特定された。また、マイナー酸性糖鎖解析の高速化検討も行い、スループット性の高い精製法とキャピラリー電気泳動法を用いた高速分析法を確立した。今後、マーカー候補として特定した糖鎖の診断性能を評価するため、高速分析法を用いて多検体解析を実施する。また、引き続きマイナー酸性糖鎖のキャリアタンパク質の特定を進め、膵癌とマイナー酸性糖鎖の関係を明らかにしたい。
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