| 研究課題/領域番号 |
20K07325
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
高津 宏之 京都大学, 薬学研究科, 研究員 (70360576)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | ATP8B2 / 知的障害 |
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| 研究実績の概要 |
重篤な知的障害の患者の網羅的遺伝子解析から、ATP8B2の変異に起因する可能性の高い患者の存在が複数明らかとなった。マウスでATP8B2の発現分布を定量的に調べたところ、トランスクリプトーム解析を基に作製されている既知のデータとは異なり、脳組織での発現が非常に高いことが明らかとなり、知的障害とATP8B2変異の相関が強く疑われた。これまで私は、ATP8B2がホスファチジルコリン(PC)を細胞膜の外葉から内葉へと特異的にフリップするフリッパーゼであることを細胞生物学レベルで示してきた。そこで、本研究では患者由来の変異を導入したATP8B2がPCフリッパーゼとしての機能に異常をきたすのかを検証するとともに、ATP8B2の脳での分子レベルでの働きを突き止め、知的障害とATP8B2の機能の関係性を明らかにすることを目的としている。令和2年度は、以下の4項目に関して研究を遂行した。定量PCRにより、組織・細胞レベルでのATP8B2の正確な発現の分布と量の把握。知的障害患者由来の変異を導入したP4-ATPase遺伝子の作製とその安定発現細胞の樹立。ATP8B2変異体のタンパク質レベルでの様々な発現解析。フリッパーゼ活性の異常の有無の検証を基本とした酵素学的解析。しかしながら、本研究進行中に重大な問題が発生した。これまで、ATP8B2として扱ってきたのは、a-isoformとして登録されていたものであったが、突然その遺伝子情報が削除されたことに気付いた。つまり、ATP8B2のa-isoformとされていたものは公的には存在しない、と判定されたものと考えられた。そのため、一部遺伝情報の異なる他のisoform、(c)や(e)をクローニングし直して、改めてデータを取り直す必要が生じた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初から、ATP8B2として扱ってきたのは、a-isoformとして登録されていたものであったが、突然その遺伝子情報が削除されたことに気付いた。つまり、ATP8B2のa-isoformとされていたものは公的には存在しない、と判定されたものと考えられた。そのため、N末端の一部遺伝情報の異なる他のisoform、(c)や(e)をクローニングし直して、改めて一からデータを取り直す必要が生じた。
そこにコロナ禍による全般的な実験の遅延が重なり、進捗が遅れてしまった。
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| 今後の研究の推進方策 |
ATP8B2の新たな遺伝子のクローニングも終わり、知的障害と関連のありそうな変異の導入も完了した。また、これまで3種類の変異に関して研究を進行させていたが、共同研究先より、新たに第4の変異の知見ももたらされた。この新たな変異も含めて、研究を進行させていく所存である。現在、発現細胞の樹立を進行中である。もう2年間あるので、これから改めて基礎データの取り直しを行っていく。今年度中には、新たに神経細胞を用いた実験にも着手していきたいと考えている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
これまでの研究は主に、これまでの蓄積されてきた物品の余剰分で賄われてきたため、今年度の経費は低く抑えられた。また、研究内容も、大幅な変更が生じたため、基本的な実験が多くなったことも研究費が抑制できた要因の一つであった。
次年度からは、当初に予定されていた研究内容に戻り、遅れを取り戻すため、必要な物品も増えることが想定される。
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