| 研究課題/領域番号 |
20K07409
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
高澤 啓 札幌医科大学, 医学部, 准教授 (00593021)
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| 研究分担者 |
秋元 太志 札幌医科大学, 医学部, 助教 (20815435)
青山 智志 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (50737781)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 子宮頸部腺がん / エストロゲン / エストロゲン受容体 |
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| 研究実績の概要 |
子宮頸部腺がん(以下、頸部腺がん)は核内エストロゲン受容体(ER)が陰性であることから、エストロゲン非依存性がんとして理解されてきた。我々は、頸部腺がんの手術材料および細胞株で膜型エストロゲン受容体GPR30が高発現し、エストロゲン依存性にタイト結合蛋白質 claudin-1発現を調節して悪性化に関与していることなどを明らかにした(Akimoto et al. Neoplasia, 2018)。本研究では、GPR30を軸にエストロゲンが寄与する悪性化メカニズムを明らかにし、頸部腺がんをエストロゲン依存性がんとして再定義し、新たな治療戦略策定へつなげることを目的とする。その達成のため、頸部腺がんにおいて①エストロゲン関連刺激が腫瘍に及ぼす効果、②多層オミクス解析によりエストロゲン関連刺激の分子メカニズム、③ヒトパピローマウイルス(HPV)感染とGPR30の関連、を明らかにする
これまでに、頸部腺癌手術材料を用いた免疫組織化学的検討を行った。頸部腺癌の手術症例に対し、GPR30、ER、p16、EPV E6、HPV E7の免疫染色を行い、陽性強度・面積を評価しスコア化した。HPV E7については、良好な染色性が得られなかったため、以降の検討は行っていない。病理組織学的因子との関連を解析したところ、T因子や病期とGPR30発現との間に有意な関連があった。ERの発現と予後との有意な相関は得られなかった。P16, HPV E6の染色態度とT因子や病期との間に有意な関連は見られなかった。頸部腺がん細胞株にエストロゲン、GPR30作動薬を暴露し、比較プロテオーム解析を行った。エストロゲン、GPR30作動薬で共通して増加するタンパク質を複数同定した。昨年度から、CRSPR-Cas9を用いてGPR30の欠損株作成を複数回、複数細胞株で試みているが、現在まで、欠損株の樹立には至っていない。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
頸部腺がん手術材料を用いた免疫組織化学的検討では、良好な結果を得られたため、論文として報告ずみである。p16, HPV E6の免疫染色では、病理組織学的因子との関連は見られなかった。GPR30高発現株作成のため、FLAGタグしたGPR30発現ベクターを構築した。GPR30の欠損株の作製には難渋している。これまでにCRSPR-Cas9を用いて欠損株の樹立を試みているが、株化には至っていない。そこで、CRISPR-Cas9 HDRシステムを導入することにする。GPR30については未施行であるが、他のタンパク質について、高効率に発現欠損株が樹立できることを確認しており、このシステムを用いてGPR30発現欠損株の樹立を目指す。
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| 今後の研究の推進方策 |
GPR30発現抑制実験はレンチウイルスシステムを用いたshRNAの導入により行う予定である。GPR30発現欠損株が得られない場合は、発現抑制株を用いて、増殖能、遊走能、浸潤能などの変化を解析する。FLAGタグしたGPR30発現ベクターを細胞株に導入し、GPR30高発現株を作製し、表現形を解析する。これらの細胞について、比較プロテオーム解析、RNAseqなどによる網羅的な解析を行う。
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