オルガノイドを用いた胃発癌機構解析

2022 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20K07422
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 国田 朱子 東京大学, 医学部附属病院, 特任講師 (50608768)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: 胃癌 / オルガノイド / 腸上皮化生

研究実績の概要

前年度開発したレンチウイルスによるオルガノイドへの遺伝子導入法の改良に取り組んだ。細胞数やレンチウイルスのMOIを変更することによりこれまで20%程度であった導入効率が概ね30%に向上した。改良したプロトコルを用いてCDX2発現胃オルガノイドを樹立を行い樹立したオルガノイドをSCIDマウス皮下へ移植しxenograft作製を試みたが生着が認められなかった。今後より重度の免疫不全マウスであるNOGやNSGマウスへの移植を実施し腫瘍が生着した場合は組織の形態変化やMUC2, CDX2の発現を免疫組織染色により検討し腸上皮化生様の変化が認められるか検証したい。一方CRISPR/Cas9システムによりTP53及びAPCのノックアウトに取り組んだ。条件検討を重ねたがリポフェクション法では遺伝子編集効率が低く、さらにクローニングの際に従来の方法では細胞が死滅しノックアウトクローンの樹立ができなかった為、今年度は新たにマトリゲルコートプレートに微小区画を作製したプレートを用いて実施を開始し、良好な結果を得ている。今後さらに検証を続けオルガノイドのクローニング法を確立したい。またレンチウイルスによるCas9の導入を実施しTP53及びAPCノックアウトに取り組み、胃発癌モデル完成を目指す。さらに腸上皮化生より樹立したオルガノイドの 特性解析(ゲノム、エピゲノム変化解析)に取り組む。腸上皮化生オルガノイドの発現プロファイルやゲノム、エピゲノム変化、増殖能を解析し腸上皮化生の胃発癌への寄与を明らかにしたい。

研究成果

• [雑誌論文] Tie2-Cre-Induced Inactivation of Non-Nuclear Estrogen Receptor-α Signaling Abrogates Estrogen Protection Against Vascular Injury (2023)
  • 著者名/発表者名: Liu Pang-Yen、Fukuma Nobuaki、Hiroi Yukio、Kunita Akiko、Tokiwa Hiroyuki、Ueda Kazutaka、Kariya Taro、Numata Genri、Adachi Yusuke、Tajima Miyu、Toyoda Masayuki、Li Yuxin、Noma Kensuke、Harada Mutsuo、Toko Haruhiro、Ushiku Tetsuo、Kanai Yoshimitsu、Takimoto Eiki、Liao James K.、Komuro Issei
  • 雑誌名: JACC: Basic to Translational Science 巻: 8 ページ: 55～67
  • DOI: 10.1016/j.jacbts.2022.07.001
  • 査読あり
• [雑誌論文] Loss of viral genome with altered immune microenvironment during tumour progression of Epstein‐Barr virus‐associated gastric carcinoma (2023)
  • 著者名/発表者名: Kondo Atsushi、Shinozaki‐Ushiku Aya、Rokutan Hirofumi、Kunita Akiko、Ikemura Masako、Yamashita Hiroharu、Seto Yasuyuki、Nagae Genta、Tatsuno Kenji、Aburatani Hiroyuki、Koinuma Daizo、Ushiku Tetsuo
  • 雑誌名: The Journal of Pathology 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.1002/path.6067
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Microsatellite instability profiles of gastrointestinal cancers: comparison between non‐colorectal and colorectal origin (2022)
  • 著者名/発表者名: Shinozaki‐Ushiku Aya、Kunita Akiko、Iwasaki Akiko、Kato Moe、Yamazawa Sho、Abe Hiroyuki、Ushiku Tetsuo
  • 雑誌名: Histopathology 巻: 82 ページ: 466～477
  • DOI: 10.1111/his.14830
  • 査読あり
• [雑誌論文] High‐grade transformation of pancreatic neuroendocrine tumor associated with TP53 mutations: A diagnostic pitfall mimicking neuroendocrine carcinoma (2022)
  • 著者名/発表者名: Tanaka Mariko、Shinozaki‐Ushiku Aya、Kunita Akiko、Yasunaga Yoichi、Akamatsu Nobuhisa、Hasegawa Kiyoshi、Ushiku Tetsuo
  • 雑誌名: Pathology International 巻: 72 ページ: 411～418
  • DOI: 10.1111/pin.13252
  • 査読あり
• [雑誌論文] KRAS mutation in intrahepatic cholangiocarcinoma: Linkage with metastasis‐free survival and reduced E‐cadherin expression (2022)
  • 著者名/発表者名: Tanaka Mariko、Kunita Akiko、Yamagishi Makoto、Katoh Hiroto、Ishikawa Shumpei、Yamamoto Hiroyuki、Abe Jun、Arita Junichi、Hasegawa Kiyoshi、Shibata Tatsuhiro、Ushiku Tetsuo
  • 雑誌名: Liver International 巻: 42 ページ: 2329～2340
  • DOI: 10.1111/liv.15366
  • 査読あり
• [雑誌論文] KRAS variant allele frequency, but not mutation positivity, associates with survival of patients with pancreatic cancer (2022)
  • 著者名/発表者名: Suzuki T、Masugi Y、Inoue Y、Hamada T、Tanaka M、Takamatsu M、Arita J、Kato T、Kawaguchi Y、Kunita A、Nakai Y、Nakano Y、Ono Y、Sasahira N、Takeda T、Tateishi K、Uemura S、Koike K、Ushiku T、Takeuchi K、Sakamoto M、Hasegawa K、Kitago M、Takahashi Y、Fujishiro M
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 113 ページ: 3097～3109
  • DOI: 10.1111/cas.15398
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Enhanced PD-L1 Expression in LMP1-positive Cells of Epstein-Barr Virus associated Malignant Lymphomas and Lymphoproliferative Disorders (2022)
  • 著者名/発表者名: Kume Ayako、Shinozaki-Ushiku Aya、Kunita Akiko、Kondo Atsushi、Ushiku Tetsuo
  • 雑誌名: American Journal of Surgical Pathology 巻: 46 ページ: 1386～1396
  • DOI: 10.1097/PAS.0000000000001919
  • 査読あり
• [雑誌論文] Somatic GJA4 gain-of-function mutation in orbital cavernous venous malformations (2022)
  • 著者名/発表者名: Hongo Hiroki et al
  • 雑誌名: Angiogenesis 巻: 26 ページ: 37～52
  • DOI: 10.1007/s10456-022-09846-5
  • 査読あり
• [学会発表] RNAパネル検査に適した病理組織検体の取り扱い方法の最適化 (2022)
  • 著者名/発表者名: 国田朱子,牛久綾,牛久哲男
  • 学会等名: 第81回日本癌学会学術総会
• [学会発表] 胃癌およびその他の消化管癌におけるマイクロサテライト不安定性検査の妥当性の比較 (2022)
  • 著者名/発表者名: 牛久綾,国田朱子,牛久哲男
  • 学会等名: 第81回日本癌学会学術総会
• [学会発表] 膵癌におけるDroplet digital PCRを用いたKRAS変異検出: 多施設コホートにおける臨床検体の解析 (2022)
  • 著者名/発表者名: 鈴木 辰典, 眞杉 洋平, 高松 学, 濱田 毅, 田中 麻理子, 国田 朱子, 中野 容, 立石 敬介, 小池 和彦, 牛久 哲男, 坂元 亨宇, 竹内 賢吾, 北郷 実, 藤城 光弘
  • 学会等名: 第81回日本癌学会学術総会
• [学会発表] TP53変異付加により悪性度が高まったと考えられる膵神経内分泌腫瘍の進展過程をとらえた剖検例 (2022)
  • 著者名/発表者名: 近藤 篤史, 田中 麻理子, 大澤 一太, 牛久 綾, 国田 朱子, 安永 瑛一, 赤松 延久, 小峯 弓子, 鈴木 伸三, 藤城 光弘, 長谷川 潔, 牛久 哲男
  • 学会等名: 第68回日本病理学会秋期特別総会