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本申請課題を通して研究代表者は，三次元（3D）培養がん細胞を腫瘍モデルとし，サイトケラチンに着目した細胞死，解糖酵素タンパク質およびmRNA発現の亢進および細胞接着の観点から，腫瘍形成および悪性化に重要な因子を見出した。
最終年度は，特に膵臓がんに着目した研究を実施し，膵臓がん細胞株を3D培養すると大幅にglucose-6-phosphate isomerase (GPI)タンパク質量が増加すると見出した。また，膵臓がんや大腸がん細胞株を3D培養し，解糖系酵素のmRNA発現量を解析したところ，多くの解糖系酵素のmRNAが増加した。この中でも特に重要と考えられる因子について，前年度までに見出した解糖系酵素のアイソザイムaldolase Cおよびenolase 2に加えて，モノクローナル抗体を作製し，タンパク質レベルでの亢進を確認する足掛かりとなった。また，これまでに3D培養細胞において分解されると見出したcytokeratin 18 (CK18)について，CK18の分解が細胞死の結果であると推測し，どのような細胞死においてCK18が分解されるかを解析した。その結果，3D培養がん細胞において，特定の抗がん剤を処理した際にCK18の分解が多く観察され，これらの抗がん剤が誘導する細胞死が3D培養がん細胞内部に生じている可能性が示唆された。さらに，3D培養すると，他のサイトケラチンが大幅に増加し，このサイトケラチンに対するモノクローナル抗体を作製した。また，3D培養した大腸がん細胞にmRNAの増加が認められたHER2についてモノクローナル抗体を作製し，学術論文として報告した。
今後も3D培養膵臓がん腫瘍モデルに着目し，解糖系酵素やエネルギー代謝から薬物耐性機構に関わる重要な因子の発現解析や，3D培養がん細胞の微小環境要因の解明研究を進められると考える。
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