| 研究実績の概要 |
成人T細胞白血病（ATL）では、高頻度にHTLV-1ゲノムの欠失があることが知られる。欠失型のプロウイルスを有するATLでは、完全型と比べて治療成績が異なることが知られ臨床においてATL発症者のプロウイルスの欠失を簡便かつ鋭敏に捉えることは、治療戦略の策定にも役立ち重要と考えられる。本研究では、プロウイルスゲノム欠失検出の意義および臨床検査への応用の可能性について、キャリア（Asymptomatic carrier、以下AC）およびATLでのHTLV-1ゲノムの欠失状況を定量的に評価し、効果的な臨床検査法を開発することを目的とした。
HTLV-1の特定の遺伝子領域の特異的プライマー・プローブセットをそれぞれ異なる色素(FAM, VIC, NED)で設計し、デジタルPCR法でmultiplex (3-plex)化してHTLV-1各遺伝子領域の相対比の測定を試みた。臨床検体で安定して検出できるproviral loadを評価した結果、HTLV-1感染細胞が末梢血単核球中に約1.0%以上含まれるとデジタルPCRで欠失を定量検出できた。合成オリゴDNAにより分離可能なコピー数の比を求めたところ、pX領域に対して20%以上の違いがあれば、ターゲット領域の定量結果の比の有意な違いとして欠失を検出できた。
HTLV-1陽性者のPVL 1%以上のACおよびATL検体においても欠失解析を行ったところACでもATLでも欠失型プロウイルスが検出された。一部のATLでは欠失型プロウイルスが極めて高い割合を占めることを示す結果が得られた。これらのことからデジタルPCRを用いることで、ACおよびATLにおけるプロウイルス欠失を定量的かつ高感度に検出できることを示し、HTLV-1感染におけるプロウイルス欠失の実態を評価した。また臨床検査への応用が可能であることが確認された。
|
