| 研究課題/領域番号 |
20K07674
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
加藤 琢磨 三重大学, 医学系研究科, 准教授 (60224515)
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| 研究分担者 |
王 立楠 三重大学, 医学系研究科, 産学官連携講座助教 (00589484)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | キメラ抗原受容体 / γδＴ細胞 / off-the-shelf / アロ反応性 / 移植片対宿主反応 / 抗酸化因子 / 疲弊抵抗性 |
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| 研究実績の概要 |
本研究ではγδ型T細胞を用いて、免疫抑制に抵抗性を付与するGITRシグナル伝達可能なGITRリガンド（GITRL）を搭載したCAR-Tを調整し、γδ型T細胞の特性である抗体依存性細胞傷害（ADCC）活性を利用した多重標的化、アロ未反応性を利用したoff-the-shelf化を介して固形がんに対するCAR-T細胞療法のPOCを確立する。昨年度までに、細胞内にCD28とCD3zetaのシグナル伝達ドメインを含む癌胎児性抗原（CEA）特異的CARとGITRLを同時に発現するγδ型T細胞（CEA.CAR-GITRL-gdT）を調製し、GITRL未掲載のCAR-T（CEA.CAR-gdT）に比較して、試験管内で抗原特異的サイトカイン産生能と細胞傷害活性能が増強されていることを明らかにした。ヒト膵がん細胞株BxPC-3担癌させた重度免疫不全マウス（NOGマウス）を用いてヒト膵がん治療マウスモデルにおいて両CAR-Tは治療効果を発揮し、GITRLは弱いながら治療効果の増強を認めたが、治療効果の持続性が極めて限られていた。腫瘍組織中におけるCAR-Tの存在は長期にわたって確認されたが、経時的に腫瘍組織ならびに末梢血から回収したCAR-Tは、ex vivoにおいて抗原特異的刺激によるサイトカイン産生能が急激に失われることを認めた。本年度は、CEA.CAR-gdTに見られるこうした機能消失（疲弊）に着目し、細胞内抗酸化因子グルタチオン（GSH）によるミトコンドリア機能維持を介して、疲弊抵抗性のCAR-T、ならびに高い自己複製能をもつ幹細胞様メモリーＴ細胞（Tscm）を誘導することで新鮮CAR-Tを生体内で供給できるTscmを含むCAR-gdTを調製する培養法を確立し、その高い抗腫瘍機能を明らかにする。さらに、疲弊抵抗性・幹細胞様性質を誘導・維持する分子メカニズムを明らかにする。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
CAR-gdTを調整する際に、抗酸化因子N-acetyl-cysteine（NAC）を添加することで、細胞内グルタチオンレベル（GSH）の上昇、活性酸素種（ROS）の消去、それに伴ってミトコンドリア膜電位の低下が誘導された。NAC前処理により、サイトカイン産生能の上昇を認めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
NAC前処理により、γδ型Ｔ細胞の抗腫瘍機能の持続性（疲弊抵抗性）がin vivoで見られるかをマウスモデルを用いて明らかにする。また、Tsmマーカーを用いてNAC前処理CAR-gdT細胞集団にTsm様細胞が含まれるかを検討する。
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