| 研究課題/領域番号 |
20K07704
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
大澤 英之 自治医科大学, 医学部, 講師 (60458271)
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| 研究分担者 |
北山 丈二 自治医科大学, 医学部, 教授 (20251308)
佐田 尚宏 自治医科大学, 医学部, 教授 (20261977)
鯉沼 広治 自治医科大学, 医学部, 准教授 (20382905)
宮戸 秀世 自治医科大学, 医学部, 講師 (90813163)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 腹膜播種 / マイクロRNA / 核酸医薬 |
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| 研究実績の概要 |
胃癌腹膜播種症例の腹腔内で発現が低下しているmiR-29を対象として、腹腔内微小環境へのmiR-29の作用を明らかにするためin vitro実験を行った。miR-29を胃癌細胞株および腹膜中皮細胞に導入したところ、増殖能には影響しなかったが遊走能を低下させ、癌細胞の腹膜中皮細胞への接着能を低下させた。miR-29を発現するヒト間葉系幹細胞を樹立し、miR-29高発現エクソソームを回収して胃癌細胞株および腹膜中皮細胞に添加したところ、miR-29をリポフェクションで導入した時と同様に遊走能を低下させ、癌細胞の腹膜中皮細胞への接着能を低下させることが明らかになった。また、腹膜播種と関連のある他のmiRNAについても実験を行い、腹膜播種の成立過程における役割と分子機序を推定し、腹膜播種治療に利用できる可能性を探索している。
マウス骨髄から間葉系幹細胞を分離しウイルスベクターを用いてmiR-29を発現させ、miR-29b含有エクソソームを回収する手法を確立した。マウスの細胞を用いた実験においても、癌細胞および腹膜中皮細胞に対するmiR-29高発現エクソソームの効果は同様で、遊走能や癌細胞接着能の低下を来した。マウスに腹膜播種を来す胃癌細胞株YTN16を用いた同種移植モデルを用いた実験では、播種細胞数と観察期間を複数の条件で投与し、今後の実験に適した条件を導き出した。miR-29高発現エクソソームを用いて腹膜播種の予防実験に取り組み、エクソソームを利用して標的miRNAを腹腔に導入する方法の有用性を検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ウイルスベクターを用いてmiR-29b高発現エクソソームを作製し、in vitro実験で効果を証明した。マウス胃癌腹膜播種モデルを用いたin vivo実験では、予備実験で投与条件を設定し、エクソソームを介したmiRNAの送達による腹膜播種予防実験を開始した。
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| 今後の研究の推進方策 |
腹膜播種の成立過程におけるmiR-29の役割と分子機序を明らかにできたので、最終年度はマウス胃癌腹膜播種モデルを用いた実験を主体に行い、必要に応じて作用機序を検証する試験管内実験を追加する。間葉系幹細胞由来のエクソソームを用いて対象となるmiRNAを腹腔内に導入する方法の有効性を検討し、miRNA創薬を通して腹膜播種再発を予防する方法論を確立することを目指す。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
ほぼ予定通りに使用している。未使用分については、実験用消耗品費として使用予定である。
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