2022 年度実施状況報告書

結核に対するシアリダーゼを用いた新規ナノ粒子ワクチンの開発

研究課題

研究課題/領域番号	20K07800
研究機関	浜松医科大学
研究代表者	榎本紀之浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (50436961)
研究分担者	須田隆文浜松医科大学, 医学部, 教授 (30291397) 永田年浜松医科大学, 医学部, 教授 (90275024)
研究期間 (年度)	2020-04-01 – 2024-03-31
キーワード	脂質ナノ粒子 / ハイブリッドエピトープ長鎖ペプチド
研究実績の概要	卵白アルブミン(OVA)由来の細胞障害性T細胞(CTL) およびヘルパーT細胞(Th)エピトープを連結したハイブリッドエピトープ長鎖ペプチド(long epitope)を作成し、シアル酸・Siglec-G・CD24複合体を分解しTLRシグナルを増強するシアリダーゼと共に、生分解性ナノ粒子(polylactic coglycolic acid: PLGA)と混合した。これを骨髄由来の樹状細胞(BMDC)へパルスし、抗原特異的リンパ球(OT-I細胞、OT-II細胞)と共培養したところ、long epitope単独群と比較し、OT-I細胞 (CTL)、OT-II細胞(Th)の強い増殖能を確認した。以上の結果から、long epitope + PLGAによるワクチンは、シアリダーゼを添加することによりさらに強力なワクチン療法となる可能性がある。しかし、実験回数を増やしているものの、未だに有意差は認められていない。また、シアリダーゼと、担体であるPLGAの相互作用の問題が存在する可能性もある。そこで次に、脂質ナノ粒子(LNP)を担体としたワクチンの作成に着手した。今回、既に作成したlong epitopeをマイクロ流路を用いてLNPに内包したLNPナノ粒子ワクチンの作成に成功した。マイクロ流路による混合時のpHなどを滴定し、long epitopeの十分な内包率を確認した。今後、このlong epitope/LNPナノ粒子ワクチンの免疫誘導能を検討する予定である。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由 Long epitope + PLGAによるワクチンは、シアリダーゼを添加することによりさらに強力なワクチン療法となる可能性を認めたものの、実験回数を増やしているが未だに有意差は認められていない。その理由として、添加するシアリダーゼの濃度やタイミング、シアリダーゼによって増強されるLPSを添加するタイミングなどが影響している可能性がある。これらを調整し至適投与量の調整に時間を要した。さらに、long epitopeと脂質ナノ粒子(LNP)を混合したワクチンの作成に着手したため時間を要した。
今後の研究の推進方策	今後、今回新たに作成したlong epitope/LNPナノ粒子ワクチンの免疫誘導能を確認し、さらにin vivo実験での至適投与量とタイミングを検証する予定である。
次年度使用額が生じた理由	Long epitope + PLGAによるワクチンは、シアリダーゼを添加することによりさらに強力なワクチン療法となる可能性を認めたものの、実験回数を増やしているが未だに有意差は認められていない。その理由として、添加するシアリダーゼの濃度やタイミング、シアリダーゼによって増強されるLPSを添加するタイミングなどが影響している可能性がある。これらを調整し至適投与量の調整に時間を要した。さらに、long epitopeと脂質ナノ粒子(LNP)を混合したワクチンの作成に着手したため時間を要した。今後、今回新たに作成したlong epitope/LNPナノ粒子ワクチンの免疫誘導能を確認し、さらにin vivo実験での至適投与量とタイミングを検証する予定である。