| 研究課題/領域番号 |
20K07912
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| 研究機関 | 川崎医科大学 |
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研究代表者 |
大澤 裕 川崎医科大学, 医学部, 講師 (80246511)
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| 研究分担者 |
砂田 芳秀 川崎医科大学, 医学部, 教授 (00240713)
西松 伸一郎 川崎医科大学, 医学部, 准教授 (20222185)
藤野 雅広 川崎医療福祉大学, 医療技術学部, 講師 (50633856)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | カベオリン-3 / 神経型No合成酵素 / 筋ジストロフィー / 筋肥大 / 筋萎縮 |
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| 研究実績の概要 |
筋鞘膜のジストロフィン糖蛋白複合体の構成蛋白質であるnNOSは、ジストロフィン欠損デュシェンヌ型筋ジストロフィーで著減するが、この酵素の筋ジストロフィー発症における役割の全容は解明されていない。われわれは、独自に作出した筋ジストロフィーマウスの解析から、nNOSが特定部位のリン酸化により活性化し、筋芽細胞融合と筋再生を促進するこれまで知られていなかった分子機構を発見した(未発表)。本研究は、このリン酸化nNOSが、様々な筋ジストロフィー病態に対し抑制的に働くと仮説、リン酸化部位を常時活性化させたnNOSを大量発現させた筋ジストロフィーモデルマウスを作出して解析する。2020年度は、骨格筋特異的プロモーター下に、リン酸化部位をアミン酸置換により常時活性化したnNOS相補DNAを繋いだトランスジーンを作製した。このトランスジーンを、野生マウス受精卵に注入して、トランスジェニックマウスを作出し、現在、その系統維持に取り組んでいる。2021年度から、このnNOS常時活性化トランスジェニックマウスと、ジストロフィン欠損、およびカベオリン-3欠損筋ジストロフィーモデルマウスを交配する。それぞれのモデルマウスと比較解析して、筋ジストロフィー改善の有無を検証する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
常時活性化したnNOSトランスジーンを作製して、野生マウス受精卵に注入しnNOS常時活性化トランスジェニックマウスの作出に成功したため。
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| 今後の研究の推進方策 |
交配により誕生する常時活性型筋ジストロフィーモデルマウスと、筋ジストロフィーモデルマウスの骨格筋比較解析により、筋ジストロフィー改善の有無を検証する。これによりnNOS活性化が、様々な筋ジストロフィー病態に対し抑制的に働くか否かを解明し、この分子の治療介入の可能性を探る。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
2020年度は、まず、トランスジーンを川崎医科大学で作成した。次いで、このトランスジーンを外部業者に送付、委託経費により野生型マウス受精卵に注入した。これにより多数のラインの常時活性型nNOSトランスジェニックマウス胚が得られ、マウス作出は容易であった。この結果から、ジストロフィン欠損、ないしカベオリン-3欠損マウスについては、受精卵へのトランスジーン注入には、委託経費を使用せず、作出された常時活性型nNOSトランスジェニックマウスとの交配を川崎医科大学で実施する方針とした。これにより常時活性型nNOS発現ジストロフィン欠損、ないし常時活性型nNOS発現カベオリン-3欠損マウスを作出・系統維持する。このため、2020年度は委託経費の節減が可能となり、2021年度以降の、マウス飼育費用、骨格筋解析に使用して、研究進捗を計る。
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