microRNAを用いた新規の肝線維化診断法の確立と肝線維化治療法の開発

2021 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 20K08314
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 松浦 健太郎 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 講師 (30580576)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: miRNA

研究実績の概要

申請者はこれまでの研究から、末梢血中のmiRNA発現レベルは肝線維化進展度のバイオマーカーとなる可能性を見出している。本研究では、新規の細胞外小胞（Extracellular vesicles: EVs）精製技術を用い、これまでのヒト検体を用いた検討とは異なるC型肝炎ウイルス排除後の肝線維化改善過程における検体を用いて、血清EVs中のmiRNA発現解析を行い、新規の肝線維化バイオマーカーの確立を目指す。さらに、同定したmiRNAの肝線維化進展および線維化改善に与える影響について機能解析し、新規の核酸創薬：肝線維化改善薬を開発する。治療によりHCV排除が得られた肝硬変患者の血清から新規のEVs精製技術である多孔質ガラスを用いたスピンカラムを用いて効率的に血清中のEVsを回収し、経時的に肝線維化・予備能の改善した患者群と、改善しない群におけるEVs中のmiRNA解析をマイクロアレイを用いて網羅的に行い、肝線維化・予備能の改善に関連する候補miRNAを同定した。現在、候補miRNAについて別検体を用いてqPCRで再現性を検証している。また、同定したmiRNAの肝線維化に与える影響について、insilico解析、細胞株、動物モデルを用いて機能解析し、新規の核酸創薬：肝線維化改善薬を開発する。
また、治療によりC型肝炎ウイルスの排除された肝硬変患者の保存血清を用いて、その後の肝線維化・予備能の改善・悪化に関連するケモカイン/サイトカインの解析を進め、有意なタンパクを同定し、論文1編を投稿中、1編を作成中である。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

臨床検体を用いた検討はおおむね順調に進行しているが、細胞株、動物実験は遅れている。

今後の研究の推進方策

候補miRNAについて別検体を用いてqPCRやddPCRで再現性を検証する。同定したmiRNAの肝線維化に与える影響について、in silico解析、細胞株、動物モデルを用いて機能解析し、新規の核酸創薬：肝線維化改善薬を開発する。C型肝炎ウイルス排除後の肝線維化・予備能の改善・悪化に関連するケモカイン/サイトカインの検討について論文投稿を完結させる。

次年度使用額が生じた理由

コロナ渦の影響で研究が遅滞しているため。遅滞した研究を遂行する。

研究成果

• [雑誌論文] Time-course changes in liver functional reserve after successful sofosbuvir/velpatasvir treatment in patients with decompensated cirrhosis. (2022)
  • 著者名/発表者名: Atsukawa M, Tsubota A, Kondo C, Toyoda H, Nakamuta M, Takaguchi K, Watanabe T, Hiraoka A, Uojima H, Ishikawa T, Iwasa M, Tada T, Nozaki A, Chuma M, Fukunishi S, Asano T, Ogawa C, Abe H, Kato K, Hotta N, Shima T, Matsuura K, et al.
  • 雑誌名: Hepatol Res. 巻: 52 ページ: 235-246
  • DOI: 10.1111/hepr.13739
  • 査読あり
• [雑誌論文] Liver-related events after direct-acting antiviral therapy in patients with hepatitis C virus-associated cirrhosis. (2022)
  • 著者名/発表者名: Tahata Y, Hikita H, Mochida S, Enomoto N, Kawada N, Kurosaki M, Ido A, Miki D, Yoshiji H,Takikawa Y, Sakamori R, Hiasa Y, Nakao K, Kato N, Ueno Y, Yatsuhashi H, Itoh Y, Tateishi R, Suda G, Takami T, Nakamoto Y, Asahina Y, Matsuura K, et al.
  • 雑誌名: J Gastroenterol. 巻: 57 ページ: 120-132
  • DOI: 10.1007/s00535-021-01845-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characteristics and Prognosis of De Novo Hepatocellular Carcinoma After Sustained Virologic Response. (2021)
  • 著者名/発表者名: Toyoda H, Hiraoka A, Uojima H, Nozaki A, Shimada N, Takaguchi K, Abe H, Atsukawa M, Matsuura K, et al.
  • 雑誌名: Hepatol Commun. 巻: 5 ページ: 1290-1299
  • DOI: 10.1002/hep4.1716
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A novel noninvasive formula for predicting cirrhosis in patients with chronic hepatitis C. (2021)
  • 著者名/発表者名: Atsukawa M, Tsubota A, Kondo C, Uchida-Kobayashi S, Takaguchi K, Tsutsui A, Nozaki A, Chuma M, Hidaka I, Ishikawa T, Iwasa M, Tamai Y, Tobari M, Matsuura K, e al.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 16 ページ: e0257166
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0257166
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] HCV排除後の肝硬変患者における血清サイトカイン/ケモカイン発現解析 (2021)
  • 著者名/発表者名: 名倉義人、松浦健太郎、鈴木孝典、藤原圭、野尻俊輔、田中靖人
  • 学会等名: 第57回日本肝臓学会総会