| 研究課題/領域番号 |
20K08386
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
松本 俊彦 山口大学, 大学院医学系研究科, 講師 (70634723)
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| 研究分担者 |
藤澤 浩一 山口大学, 大学院医学系研究科, 講師 (00448284)
高見 太郎 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (60511251)
山本 直樹 山口大学, 教育・学生支援機構, 教授 (90448283)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 間葉系幹細胞 |
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| 研究実績の概要 |
我々は肝移植に代わる肝硬変治療法として「自己骨髄間葉系幹細胞 (MSC)を用いた肝臓再生療法」を開発してきた。臨床研究で有効性が示唆されたが、効果が短期間であることが課題であった。そこで本研究では、MSC由来exosomeに、miR-5682の肝星細胞に対する線維産生抑制効果を付加した抗線維化作用増強exosomeを作製する。miR-5682は肝星細胞が産生する主な線維（Collagen I, III, V, Elastin）の発現を網羅的に抑制するmicroRNAである。これにより低侵襲かつ頻回投与が可能な抗線維化治療法を開発し、「長期継続型のMSCを用いた低侵襲肝臓再生療法」のProof of concept 取得を目指す。
令和3年度は、レンチウイルスベクターを用いてmiR-5682導入MSC細胞株に加え、miR-5682導入単球細胞株を作製した。PEGを用いたexosome回収法を確立し、これらmiR-5682導入細胞株由来exosomeでは、非導入細胞株と比べてexosome中にmiR-5682が高発現することを確認した。miR-5682導入細胞株由来exosomeの肝星細胞に対する作用の検討では、exosome添加による肝星細胞のCollagen I, III発現低下を確認した。また、Gubra-Amylin NASH (GAN)食を用いてNASH肝線維化モデルマウスを作製し、miR-5682導入細胞株由来exosomeの抗線維化効果の評価を開始した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
miR-5682導入MSC細胞株を作製するとともに、exosome中にmiR-5682をより高発現するmiR-5682導入単球細胞株を作成した。さらに、miR-5682導入細胞株由来exosomeの肝星細胞に対する作用を検討し、肝星細胞におけるCollagen I, IIIの発現低下を認めた。肝星細胞にexosomeを介して目的とするmicroRNAの導入することは可能であり、drug delivery systemとして利用することの妥当性を確認した。また、当初の計画通り、Gubra-Amylin NASH (GAN)食を用いてNASH肝線維化モデルマウスを作製し、miR-5682導入細胞株由来exosomeの抗線維化効果の評価を開始しており、これまでの進捗はおおむね順調に進展していると考えている。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和3年度の研究成果を受けて、マウス肝線維化モデルを作製してmiR-5682 mimic 投与群、miR-5682導入MSC exosome群、miR-5682非導入MSC exosome群、control群に分け、頻回投与後の肝線維化を評価する。これによりmiR-5682単独投与とmiR-5682含有MSC exosome投与の比較を含むmiR-5682の肝線維化改善効果について検討し、「長期継続型のMSCを用いた低侵襲肝臓再生療法」のProof of concept 取得する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初の計画では、令和2年度にin vivoでマウス肝線維化モデルを用いたmiR-5682 mimicの抗線維化効果と安全性の評価を行うことを予定していたが、新型コロナウイルス感染症の影響もあり、試薬の供給や継続的な実験が困難になることが予想され、in vitroでのレンチウイルスを用いたmiR-5682導入MSCの作製を前倒しで行った。in vivoの遺伝子導入試薬は高価であるため、この計画の変更に伴い次年度以降使用額が生じることとなった。令和4年度の計画では、マウス肝線維化モデルを用いて、miR-5682 mimic及びmiR-5682含有exosomeの抗線維化効果と安全性の評価を行う予定としており、令和3年度の次年度使用額と令和４年度の助成金を合わせてこれらの研究を推進する。
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