肺線維症におけるγδ細胞の役割解明と治療応用に向けた基盤研究

2020 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 20K08543
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 坂本 憲穂 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 講師 (30448493)
• 研究分担者: 迎 寛 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (80253821) ; 田中 義正 長崎大学, 先端創薬イノベーションセンター, 教授 (90280700)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: γδT細胞 / 肺線維症 / コラーゲン / 肺線維芽細胞 / 気管支肺胞洗浄

研究実績の概要

肺線維化とヒトγδ型T細胞の相関を明らかにするために、まずは細胞モデルを用いて検証を行った。ヒトγδ型T細胞は末梢血単核球分画からIL-2と独自に開発した新規抗原であるPTA(tetrakis‐pivaloyloxymethyl 2‐(thiazole‐2‐ylamino) ethylidene‐1,1‐bisphosphonate)を用いて増殖誘導を行い、高純度かつ大量のγδ型T細胞を得ることが可能であった。細胞モデルとしてヒト肺線維芽細胞とヒトγδ型T細胞を共培養させたところ、肺線維芽細胞の１型コラーゲンの減少、COL1A1-mRNA、COL1A2-mRNAの発現の低下を認めた。またCulture Insertを用いて細胞間の直接接触を阻害すると、このコラーゲンの抑制作用は消失した。これらの結果からヒトγδ型T細胞の肺線維芽細胞に対するコラーゲン抑制作用は直接接触が必要であることが示唆された。またγδ型T細胞の活性剤であるHMBPP（(E)-4-ヒドロキシ-3-メチル-2-ブテニル二リン酸）をヒトγδ型T細胞に作用させたところ、 コラーゲン減少を誘導するγδ型T細胞の必要数は大幅に減少し、またCulture Insertを用いた場合でもコラーゲンの抑制作用を認めた。HMBPPで刺激したヒトγδ型T細胞はIFNγやTNFαなどのサイトカインを放出するため、コラーゲン抑制作用の機序として液性因子の関与も示唆された。
また本研究では線維化性間質性肺炎患者の血液、気管支肺胞洗浄液中のγδ型T細胞の免疫学的解析も実施しており、症例集積中である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

細胞を用いた検討では、肺線維芽細胞における抗線維化作用を証明できており、ヒト検体を用いた検討では、肺胞洗浄液でのγδT細胞比率の比較が可能となってきているため。

今後の研究の推進方策

今後は、肺線維症患者からのγδT細胞の効果、肺線維症動物モデルを用いた検討を予定している。またヒト肺胞洗浄液を用いた検討では、各種疾患と臨床所見との関連を予定している。

次年度使用額が生じた理由

学会の中止やオンライン開催に伴い旅費が発生しなかったため次年度使用額が発生した。また、実験に必要な消耗品が安価で購入できたことで、こちらでも次年度使用額が発生した。次年度については、肺線維症患者のγδT細胞を用いたin vitroでの効果を実証するためのwestern blot用の試薬や、肺線維症マウスモデルでの効果を確かめるためのマウス購入や染色試薬などの購入に充てる予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Human immunodeficiency virus-associated vacuolar encephalomyelopathy with granulomatous-lymphocytic interstitial lung disease improved after antiretroviral therapy: a case report (2020)
  • 著者名/発表者名: Akagi Kazumasa、Yamamoto Kazuko、Umemura Asuka、Ide Shotaro、Hirayama Tatsuro、Takazono Takahiro、Imamura Yoshifumi、Miyazaki Taiga、Sakamoto Noriho、Shiraishi Hirokazu、Takahata Hideaki、Zaizen Yoshiaki、Fukuoka Junya、Morikawa Minoru、Ashizawa Kazuto、Teruya Katsuji、Izumikawa Koichi、Mukae Hiroshi
  • 雑誌名: AIDS Research and Therapy 巻: 17 ページ: 38
  • DOI: 10.1186/s12981-020-00295-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of lung microbiota between antineutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis and sarcoidosis (2020)
  • 著者名/発表者名: Fukui Shoichi、Morimoto Shimpei、Ichinose Kunihiro、Nakashima Shota、Ishimoto Hiroshi、Hara Atsuko、Kakugawa Tomoyuki、Sakamoto Noriho、Mukae Hiroshi、et al.
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 10 ページ: 9466
  • DOI: 10.1038/s41598-020-66178-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prediction of Anti-Cancer Drug-Induced Pneumonia in Lung Cancer Patients: Novel High-Resolution Computed Tomography Fibrosis Scoring (2020)
  • 著者名/発表者名: Gyotoku Hiroshi、Yamaguchi Hiroyuki、Ishimoto Hiroshi、Sato Shuntaro、Taniguchi Hirokazu、Senju Hiroaki、Kakugawa Tomoyuki、Nakatomi Katsumi、Sakamoto Noriho、Fukuda Minoru、Obase Yasushi、Soda Hiroshi、Ashizawa Kazuto、Mukae Hiroshi
  • 雑誌名: Journal of Clinical Medicine 巻: 9 ページ: 1045～1045
  • DOI: 10.3390/jcm9041045
  • 査読あり
• [雑誌論文] Corticosteroids are associated with reduced skeletal muscle function in interstitial lung disease patients with mild dyspnea (2020)
  • 著者名/発表者名: Hanada Masatoshi、Ishimatsu Yuji、Sakamoto Noriho、Nagura Hiroki、Oikawa Masato、Morimoto Yosuke、Sato Shuntaro、Mukae Hiroshi、Kozu Ryo
  • 雑誌名: Respiratory Medicine 巻: 174 ページ: 106184～106184
  • DOI: 10.1016/j.rmed.2020.106184
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pneumoconiosis with a Sarcoid-Like Reaction Other than Beryllium Exposure: A Case Report and Literature Review (2020)
  • 著者名/発表者名: Hayashi Fumiko、Kido Takashi、Sakamoto Noriho、Zaizen Yoshiaki、Ozasa Mutsumi、Yokoyama Mitsuru、Yura Hirokazu、Hara Atsuko、Ishimoto Hiroshi、Yamaguchi Hiroyuki、Miyazaki Taiga、Obase Yasushi、Ishimatsu Yuji、Eishi Yoshinobu、Fukuoka Junya、Mukae Hiroshi
  • 雑誌名: Medicina 巻: 56 ページ: 630～630
  • DOI: 10.3390/medicina56110630
  • 査読あり
• [雑誌論文] Thrombomodulin Alfa for Acute Exacerbation of Idiopathic Pulmonary Fibrosis. A Randomized, Double-Blind Placebo-controlled Trial (2020)
  • 著者名/発表者名: Kondoh Yasuhiro、Azuma Arata、Inoue Yoshikazu、Ogura Takashi、Sakamoto Susumu、Tsushima Kenji、Johkoh Takeshi、Fujimoto Kiminori、Ichikado Kazuya、Matsuzawa Yasuo、Saito Takefumi、Kishi Kazuma、Tomii Keisuke、Sakamoto Noriho、et al.
  • 雑誌名: American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine 巻: 201 ページ: 1110～1119
  • DOI: 10.1164/rccm.201909-1818OC
  • 査読あり
• [雑誌論文] Presence of heat shock protein 47-positive fibroblasts in cancer stroma is associated with increased risk of postoperative recurrence in patients with lung cancer (2020)
  • 著者名/発表者名: Miyamura Takuto、Sakamoto Noriho、Ishida Kaori、Kakugawa Tomoyuki、Taniguchi Hirokazu、Akiyama Yoshiko、Okuno Daisuke、Hara Atsuko、Kido Takashi、Ishimoto Hiroshi、Miyazaki Takuro、Matsumoto Keitaro、Tsuchiya Tomoshi、Yamaguchi Hiroyuki、Miyazaki Taiga、Obase Yasushi、Ishimatsu Yuji、Nagayasu Takeshi、Mukae Hiroshi
  • 雑誌名: Respiratory Research 巻: 21 ページ: 234
  • DOI: 10.1186/s12931-020-01490-1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Small molecule inhibitor of HSP47 prevents pro-fibrotic mechanisms of fibroblasts in?vitro (2020)
  • 著者名/発表者名: Miyamura Takuto、Sakamoto Noriho、Kakugawa Tomoyuki、Taniguchi Hirokazu、Akiyama Yoshiko、Okuno Daisuke、Moriyama Sakiko、Hara Atsuko、Kido Takashi、Ishimoto Hiroshi、Yamaguchi Hiroyuki、Miyazaki Taiga、Obase Yasushi、Ishimatsu Yuji、Tanaka Yoshimasa、Mukae Hiroshi
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 巻: 530 ページ: 561～565
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2020.07.085
  • 査読あり
• [雑誌論文] Coinfection With Multiple Nontuberculous Mycobacteria as a Possible Exacerbating Factor in Pulmonary Nontuberculous Mycobacteriosis (2020)
  • 著者名/発表者名: Naito Keisuke、Noguchi Shingo、Yatera Kazuhiro、Kawanami Toshinori、Yamasaki Kei、Fukuda Kazumasa、Ikegami Hiroaki、Akata Kentaro、Kido Takashi、Sakamoto Noriho、Saito Mitsumasa、Mukae Hiroshi
  • 雑誌名: Chest 巻: 158 ページ: 2304～2313
  • DOI: 10.1016/j.chest.2020.06.027
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of a Novel Bisphosphonate Prodrug and Zoledronic Acid in the Induction of Cytotoxicity in Human Vγ2Vδ2 T Cells (2020)
  • 著者名/発表者名: Okuno Daisuke、Sugiura Yuki、Sakamoto Noriho、Tagod Mohammed S. O.、Iwasaki Masashi、Noda Shuto、Tamura Akihiro、Senju Hiroaki、Umeyama Yasuhiro、Yamaguchi Hiroyuki、Suematsu Makoto、Morita Craig T.、Tanaka Yoshimasa、Mukae Hiroshi
  • 雑誌名: Frontiers in Immunology 巻: 11 ページ: 1405
  • DOI: 10.3389/fimmu.2020.01405
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel and potent antimicrobial effects of caspofungin on drug-resistant Candida and bacteria (2020)
  • 著者名/発表者名: Sumiyoshi Makoto、Miyazaki Taiga、Makau Juliann Nzembi、Mizuta Satoshi、Tanaka Yoshimasa、Ishikawa Takeshi、Makimura Koichi、Hirayama Tatsuro、Takazono Takahiro、Saijo Tomomi、Yamaguchi Hiroyuki、Shimamura Shintaro、Yamamoto Kazuko、Imamura Yoshifumi、Sakamoto Noriho、Mukae Hiroshi et al.
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 10 ページ: 17745
  • DOI: 10.1038/s41598-020-74749-8
  • 査読あり
• [学会発表] The Role of Epstein-Barr Virus-Encoded microRNAs in Pulmonary Fibrosis (2020)
  • 著者名/発表者名: N. Sakamoto, H. Yura, D. Okuno, T. Miyamura, A. Hara, T. Kido, H. Ishimoto, Y. Ishimatsu, H. Mukae
  • 学会等名: ATS 2020－American Thoracic Society International Conference. Virtual
  • 国際学会
• [学会発表] Immune Complexome Analysis Detects Apolipoprotein E as a Disease-Specific Immune Complex Antigen in Bronchoalveolar Fluids from Patients with Summer-Type Hypersensitivity Pneumonitis (2020)
  • 著者名/発表者名: Y. Ishimatsu, A. Hara, N. Aibara, K. Ohyama, Y. Akiyama, D. Okuno, T. Miyamura, T. Kido, H. Ishimoto, N. Sakamoto, H. Mukae
  • 学会等名: ATS 2020－American Thoracic Society International Conference. Virtual
  • 国際学会
• [学会発表] he Utility Of Combinate Detection Of Igh And Tcr Gene Rearrangement, And Malt1 Gene Translocation In Balf For The Diagnosis Of Pulmonary Lymphoma (2020)
  • 著者名/発表者名: T. Kido, H. Ishimoto, H. Ishii, K. Hara, H. Kawabata, T. Kawanami, Y. Suzuki, H. Yoshikawa, A. Hara, N. Sakamoto, N. Matsumoto, C. Yoshii, M. Fujita, M. Nakazato, J. Kadota, H. Mukae, K. Yatera
  • 学会等名: ATS 2020－American Thoracic Society International Conference. Virtual
  • 国際学会
• [学会発表] ffect of Zoledronic Acid and a Bisphosphonate Prodrug on γδ T Cell-Mediated Cytotoxicity Against Lung Cancer Cells (2020)
  • 著者名/発表者名: D. Okuno, N. Sakamoto, T. Miyamura, A. Hara, T. Kido, H. Ishimoto, H. Yamaguchi, Y. Ishimatsu, Y. Tanaka, H. Mukae
  • 学会等名: ATS 2020－American Thoracic Society International Conference. Virtual
  • 国際学会
• [学会発表] Heat Shock Protein 47 (HSP47) Positive Fibroblasts in Cancer Stroma Are Associated with Increased Risk of Postoperative Recurrence in Patients with Lung Cancer (2020)
  • 著者名/発表者名: T. Miyamura, N. Sakamoto, T. Kakugawa, K. Ishida, H. Taniguchi, D. Okuno, A. Hara, T. Kido, H. Ishimoto, T. Miyazaki, K. Matsumoto, T. Tsuchiya, H. Yamaguchi, Y. Obase, Y. Ishimatsu, T. Nagayasu, H. Mukae
  • 学会等名: ATS 2020－American Thoracic Society International Conference. Virtual
  • 国際学会
• [学会発表] 膵癌化学療法中に生じた薬剤性肺障害の検討 (2020)
  • 著者名/発表者名: 宮下 律、石本裕士、奥野大輔、宮村 拓人、由良 博一、高園 貴弘、 原 敦子、 坂本 憲穂、石松 祐二、 尾長谷 靖 、 迎 寛
  • 学会等名: 第60回日本呼吸器学会学術講演会
• [学会発表] 肺癌手術検体における，Heat shock protein 47発現の検討 (2020)
  • 著者名/発表者名: 宮村 拓人、坂本 憲穂、角川 智之、石田 佳央理、奥野 大輔、 原 敦子、 宮崎 拓郎、 城戸 貴志、石本 裕士、 松本 桂太郎、土屋 智史、石松 祐二、永安 武、迎 寛
  • 学会等名: 第60回日本呼吸器学会学術講演会