| 研究課題/領域番号 |
20K08579
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
橋本 典生 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (00771742)
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| 研究分担者 |
谷端 淳 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (00508426)
荒屋 潤 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (90468679)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | エクソソーム / 筋収縮 / 筋肥大 |
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| 研究実績の概要 |
①筋芽細胞を分化誘導し筋管を形成し、2日間の喫煙抽出液の刺激により筋管萎縮を図り、その後、2日間かけて上清のエクソソームを回収した。同時にControl筋管からもエクソソームを回収し、それらエクソソームを筋管に投与した結果、萎縮した筋管からのエクソソームは、筋管の萎縮を助長することをウエスタンブロットのミオシン重鎖（MHC)発現で確認した。蛍光染色で筋管の短径を測定しても、萎縮した筋管からのエクソソームは、筋管の短径を萎縮することを確認出来た。
②筋収縮を筋管で実現するために、電気刺激を用いる筋管収縮モデルを用いた（眞鍋らの筋収縮モデル）。その電気刺激により筋管が収縮することを確認出来た。
③筋管を10V, 1Hz, 20msの持続刺激で1時間収縮させ、その後に2日間培養した筋管は、ウエスタンブロットにおいてMHCの発現量が増強しており、筋肥大していることが確認出来た。
④次に、筋管を10V, 1Hz, 20msの持続刺激で1時間収縮させて、その後に、2日間かけて筋管からのエクソソームを回収した。回収したエクソソームを別の成熟した筋管に2日間添加した結果、収縮筋管からのエクソソームを添加した筋管のMHCの発現がコントロール筋管からのエクソソームを添加した筋管を比べて増強していることをウエスタンブロットで認め、収縮筋管からのエクソソームが筋肥大を誘導出来ていることが分かった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
筋管を電気刺激で収縮するモデルを確立することが出来た。また、筋収縮した筋管と筋委縮を誘導した筋管からのエクソソームがそれぞれ成熟した筋管の肥大を萎縮を誘導するＩｎ ｖｉｔｒｏの系が確認出来た。
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| 今後の研究の推進方策 |
筋収縮した筋管と筋委縮を誘導した筋管からのエクソソーム内のＭｉｃｒｏＲＮＡプロファイルを確認する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
ＭｉｃｒｏＲＮＡの解析費用が高価なため、それに助成金をまとめて使用する予定である。
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