| 研究課題/領域番号 |
20K08781
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
太田 昭一郎 国際医療福祉大学, 福岡薬学部, 教授 (20346886)
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| 研究分担者 |
森山 良太 国際医療福祉大学, 福岡保健医療学部, 助教 (50711363)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 線維化疾患 / アレルギー疾患 / ペリオスチン |
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| 研究実績の概要 |
細胞外マトリクスタンパク質の一つであり、マトリセルラータンパク質であるペリオスチンは、喘息、特発性・薬剤性間質性肺炎、アレルギー性鼻炎・結膜炎、アトピー性皮膚炎、強皮症、胆管癌など、様々なアレルギー・線維化疾患において血中濃度が上昇する。病変局所で発現したペリオスチンが血中に逸脱することで病変部での発現を反映していると考えれられる。われわれはペリオスチンを認識するモノクローナル抗体を取得して、血清ペリオスチン濃度測定試薬キットを開発し、血清ペリオスチン濃度が喘息のステロイド抵抗性や特発性肺線維症の呼吸機能予後を反映することを示してきた。しかし、ペリオスチンは様々な疾患で上昇するため、疾患特異性が低いことが欠点である。疾患によってその発現量が異なるペリオスチンスプライシングアイソフォームを個々に検出し、疾患ごとの発現パターンを解析することで、種々の線維化疾患を鑑別することが可能である。これらの疾患の病勢判定や予後予測を可能にするため、ペリオスチンスプライシングアイソフォームを個別に測定できる検査試薬を開発することを目指す。
今年度の進捗は下記の通りである。
1. これまでに作製したペリオスチンアイソフォームを安定発現するS2細胞を用いて、各アイソフォームのリコンビナントタンパク質を大量産生・精製中である。
2. 各アイソフォーム特異的なエクソン接合部を含む合成ペプチドをマウスに免疫して、モノクローナル抗体を作製・スクリーニングしているが、アイソフォームを特異的に検出する抗体群の取得には至っていない。今後、抗原ペプチド配列の変更、抗体作製法の改良、免疫動物の変更等を試みる予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
研究施設が使用できない期間があったことと、モノクローナル抗体の作製が予定通り進んでいないことより、全体の進捗が遅延している。
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| 今後の研究の推進方策 |
アイソフォーム特異的な抗体の作製を引き続き行なう。
1. 各アイソフォーム特異的なエクソン接合部を含む合成ペプチドをマウスまたはラットに免疫して、各アイソフォーム特異的なモノクローナル抗体を作製する。現在の方法で目的の抗体取得が困難な場合、抗原ペプチド配列の変更、抗体作製法の改良、免疫動物の変更等も試みる予定である。
2. 作製したモノクローナル抗体を用いて、ヒト血清から目的のアイソフォームのみを免疫沈降できることを確認する。
3. 作製した抗体と既存の抗体を組み合わせて、特定のアイソフォームを検出するELISAシステムを構築する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナウイルスパンデミックへの対応により研究がしばしば中断されたため、使用経費も結果的に少額となった。研究環境は改善したため、研究をスピードアップし、適切な研究費執行に努める。
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