| 研究課題/領域番号 |
20K08854
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| 研究機関 | 公益財団法人東京都医学総合研究所 |
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研究代表者 |
梶原 直樹 公益財団法人東京都医学総合研究所, 疾患制御研究分野, 主任研究員 (70453917)
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| 研究分担者 |
芝崎 太 公益財団法人東京都医学総合研究所, 病院等連携支援センター, 研究員 (90300954) [辞退]
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | インフルエンザ / H5N1 / ヘマグルチニン / シアル酸 / 中和抗体 / エピトープ |
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| 研究実績の概要 |
これまでの研究において、我々は、H5N1高病原性鳥インフルエンザウイルス (A/Vietnam/UT3040/2004)のシアル酸非依存的な感染がH5亜型のヘマグルチニン (HA)に対する抗H5 HA抗体 (3B9, 8C1, 14A7)の処置によって著しく阻害できることを見出した。また、リコンビナントHAタンパク質に対する抗H5 HA抗体の反応性およびHAタンパク質のアミノ酸配列の比較解析より、抗H5 HA抗体のエピトープ候補領域を抽出した。H5N1高病原性鳥インフルエンザウイルスの感染阻害薬の開発へ進めるためには、シアル酸非依存的な感染経路の分子機構の解明が非常に重要になる。
本年度は前年度に引き続き、抗H5 HA抗体のエピトープ解析を実施した。A/Vietnam/UT3040/2004由来のHAおよびエピトープ候補部位に変異を導入したHA発現ベクターを作製し、遺伝子導入により293T細胞に各種HAを発現させた。フローサイトメーターを用いてHAを発現した293T細胞に対する抗H5 HA抗体の反応性を検討し、3種類の抗H5 HA抗体のエピトープを決定した。また、各種HAを発現した293T細胞のセルライセートを調製し、ウェスタンブロッティングにより抗H5 HA抗体の反応性を検討した結果、抗H5 HA抗体 (3B9および14A7)はHAの立体構造や糖鎖修飾部位を認識していることが明らかになった。さらに、リバースジェネティクス法により組換えインフルエンザウイルスを作出するための各種ベクターを構築し、組換えウイルスの作出準備を進めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は、H5N1高病原性鳥インフルエンザウイルスのシアル酸非依存的な感染経路の分子機構を解明すべく、前年度に引き続き抗H5 HA抗体のエピトープ解析を実施した。また、抗H5 HA抗体のエピトープを決定し、リバースジェネティクス法による組換えインフルエンザウイルスの作出を進めた。しかしながら、シアル酸欠損細胞への感染能を評価し、感染に重要なアミノ酸を特定することができなかったため、「やや遅れている」と評価した。
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| 今後の研究の推進方策 |
前述の通り、本年度は抗H5 HA抗体のエピトープを決定した。今後の研究では、組換えインフルエンザウイルスの作出を早急に進め、抗H5 HA抗体のエピトープがA/Vietnam/UT3040/2004のシアル酸非依存的な感染に重要であるかどうかを評価する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
(理由) 現在までの進捗状況に記述した通り、組換えインフルエンザウイルスを作出し、シアル酸欠損細胞への感染能を評価することができなかった。当初の計画通りに進めることができなかったため、次年度使用額が生じた。
(使用計画) 生じた次年度使用額については、次年度中に使用する予定である。使用目的は、主として交付申請書に記載の通りであり、未解決の研究課題実施のために使用する。
具体的には、分子生物学実験試薬、細胞培養試薬、抗体等の一般試薬などの物品購入費として使用する予定である。
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