動脈硬化の発症・進展におけるアポA-Vの役割の解析：遺伝子欠損ウサギを用いた研究

2020 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 20K08858
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 新見 学 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (80644898)
• 研究分担者: 松久 葉一 佐賀大学, 総合分析実験センター, 助教 (20754253) ; チェン ヤジェ 山梨大学, 大学院総合研究部, 特任助教 (90867756) [辞退]
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: アポリポ蛋白A-V / リポ蛋白代謝 / 中性脂肪 / ウサギ / ノックアウト / ゲノム編集

研究実績の概要

CRISPR-Cas9技術を用いてapoA-Vノックアウトウサギの作製を行った。アポA-Vのエクソン1及びエクソン3を標的にしたガイドRNAを作製して、Cas9蛋白とともにNew Zealand Whiteウサギの受精卵（139個）へマイクロインジェクションを行い、偽妊娠雌性レシピエントウサギ（4匹）に受精卵を移植した。11匹のアポA-Vノックアウトウサギのファウンダー候補産仔が得られ、現在遺伝子型を解析中である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

アポA-Vノックアウトウサギのファウンダー候補産仔が得られた。

今後の研究の推進方策

遺伝子型の解析結果に応じて、脂質表現型の解析及びホモ接合体ノックアウト個体を得るための交配・繁殖に着手する。

次年度使用額が生じた理由

当該年度に物品費として使用予定であったが、使用を次年度に繰り越した。

研究成果

• [雑誌論文] Isolation and Analysis of Plasma Lipoproteins by Ultracentrifugation (2021)
  • 著者名/発表者名: Niimi Manabu、Yan Haizhao、Chen Yajie、Wang Yao、Fan Jianglin
  • 雑誌名: Journal of Visualized Experiments 巻: - ページ: 167
  • DOI: 10.3791/61790
  • 査読あり
• [雑誌論文] Apolipoprotein CIII Deficiency Protects Against Atherosclerosis in Knockout Rabbits (2020)
  • 著者名/発表者名: Yan Haizhao、Niimi Manabu、Matsuhisa Fumikazu、Zhou Huanjin、Kitajima Shuji、Chen Yajie、Wang Chuan、Yang Xiawen、Yao Jian、Yang Dongshan、Zhang Jifeng、Murakami Masami、Nakajima Katsuyuki、Wang Yao、Liu Enqi、Liang Jingyan、Chen Y. Eugene、Fan Jianglin
  • 雑誌名: Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 巻: 40 ページ: 2095～2107
  • DOI: 10.1161/ATVBAHA.120.314368
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Hyperlipidemic Rabbit Models for Anti-Atherosclerotic Drug Development (2020)
  • 著者名/発表者名: Niimi Manabu、Chen Yajie、Yan Haizhao、Wang Yao、Koike Tomonari、Fan Jianglin
  • 雑誌名: Applied Sciences 巻: 10 ページ: 8681～8681
  • DOI: 10.3390/APP10238681
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] カイロミクロンレムナントはアポE欠損ウサギの動脈硬化進展を促進させる (2021)
  • 著者名/発表者名: 新見 学、松久 葉一、北嶋 修司、範 江林
  • 学会等名: 第110回日本病理学会総会
• [学会発表] Deletion of the apoCIII gene in knockout rabbits attenuates cholesterol diet-induced hyperlipidemia and protects against atherosclerosis (2020)
  • 著者名/発表者名: Yan H, Niimi M, Zhou H, Matsuhisa F, Kitajima S, Yang X, Chen YJ, Murakami M, Nakajima K, Liang J, Jifeng Zhang J, Chen YE, Yao J, Fan J.
  • 学会等名: 88th European Atherosclerosis Society (EAS) Congress 2020
  • 国際学会