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2023 年度 実施状況報告書

敗血症病態時の好中球細胞外トラップ産生能とmicroRNAによる制御の解明

研究課題

研究課題/領域番号 20K09211
研究機関近畿大学

研究代表者

中嶋 康文  近畿大学, 医学部, 教授 (70326239)

研究分担者 竹下 淳  関西医科大学, 医学部, 研究医員 (40433263)
影山 京子  関西医科大学, 医学部, 研究医員 (80347468)
研究期間 (年度) 2020-04-01 – 2025-03-31
キーワードmicroRNA
研究実績の概要

敗血症では免疫抑制状態が生じ予後不良を来すが、我々は血球や血管内皮細胞が産生するmicroRNAが、炎症病態を修飾する重要な要因になると考える。その機序と新しい治療法を見出すために、網羅的なmiRNA発現解析、遺伝子導入手技等を用いて病態を解明し、今後の遺伝子治療を展開したい。特に好中球が放出するNETsに注目している。
ヒト骨髄性白血病細胞HL-60細胞を、ジメチルスルホキシド(DMSO)にて好中球に分化し実験を行った。HL-60 培養細胞株を用いて、in vitro での分葉核の形成と NETs 類似の構造体の誘導系を確立した。糖濃度の異なる培養液を用いた好中球の培養系において、LPSを含有する培養液で24-48時間培養後、ホルボール12-ミリスチン酸13-酢酸塩(PMA)負荷し、好中球の脱顆粒化、NETs、ヒストンを蛍光色素染色後、蛍光倒立顕微鏡で観察、また培養後の回収液をフローサイトメーターで定量化し、対象群と比較検討した。さらに細胞からTotal RNAを分離し、次世代シーケンサーを用いてmRNA及びmiRNAの発現の網羅的解析を、CLCバイオ社解析ソフト(Genomic Work Bench)を使用して行った。特にNETsを含む、細胞死・炎症惹起物質に関連するmRNA、及びそれに相補配列のあるmiRNAを選別した。Real-Time PCR法で、RNA発現の絶対定量を行った。また、上記の実験で上昇したmiRNAのmimic(Pre-miRTM miRNA Precursor Molecules, Ambion社)と、そのmiRNAに特異的なmiRNA阻害薬(Anti-miRTM miRNA Inhibitor, Ambion社)をHL-60 培養細胞株へ遺伝子導入し、好中球の脱顆粒化、NETs、ヒストンを蛍光色素染色、フローサイトメトリーで、比較検討した。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

コロナ禍で、外部委託業者の出勤時間、営業時間が限られていたため、一部の実験に遅れが生じている。

今後の研究の推進方策

(臨床研究)ICU入室患者を対象に、1)非敗血症患者、2) 耐糖能障害の無い敗血症患者、3) 耐糖能障害の有る敗血症患者から採血後、好中球を抽出し、細胞培養研究で検討した好中球の脱顆粒化、NETs、ヒストンの発現、及びmiRNA発現のデータの比較検討を行う。

次年度使用額が生じた理由

以下の実験の費用の支払いを、令和6年度に持ち越したためである。
外部委託業者に依頼した実験結果が出る予定になっているため、その費用の支払いをする必要がある。
また、その結果に基づいて、ICU入室患者を対象に、1)非敗血症患者、2) 耐糖能障害の無い敗血症患者、3) 耐糖能障害の有る敗血症患者から採血後、好中球を抽出し、細胞培養研究で検討した好中球の脱顆粒化、NETs、ヒストンの発現、及びmiRNA発現のデータの比較検討を行う予定にしているため、その実験に費用が必要である。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2023

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件)

  • [雑誌論文] Comparison of radial, dorsalis pedis, and posterior tibial arteries for ultrasound-guided arterial catheterisation with dynamic needle tip positioning in paediatric patients: a randomised controlled trial2023

    • 著者名/発表者名
      Takeshita J, Nakayama Y, Tachibana K, Nakajima Y, Hamaba H, Shime N.
    • 雑誌名

      Br J Anaesth.

      巻: 131 ページ: 739-744

    • DOI

      10.1016/j.bja.2023.07.022. Epub 2023 Aug 19.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Ultrasound-Guided Short-Axis Out-of-Plane Approach With or Without Dynamic Needle-Tip Positioning for Peripheral Venous Catheterization in Pediatric Patients: A Systematic Review With Network Meta-Analysis.2023

    • 著者名/発表者名
      Takeshita J, Nakayama Y, Tachibana K, Nakajima Y, Shime N.
    • 雑誌名

      J Cardiothorac Vasc Anesth.

      巻: 37 ページ: 2057-2064

    • DOI

      10.1053/j.jvca.2023.04.039. Epub 2023 May 5.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Ultrasound-guided short-axis out-of-plane approach with or without dynamic needle tip positioning for arterial line insertion in children: A systematic review with network meta-analysis2023

    • 著者名/発表者名
      Takeshita J, Nakayama Y, Tachibana K, Nakajima Y, Shime N.
    • 雑誌名

      Anaesth Crit Care Pain Med .

      巻: 42 ページ: 101206

    • DOI

      10.1016/j.accpm.2023.101206. Epub 2023 Feb 28.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Efficacy of perioperative prophylactic administration of corticosteroids in pediatric cardiac surgeries using cardiopulmonary bypass: a systematic review with meta-analysis2023

    • 著者名/発表者名
      Takeshita J, Nakajima Y, Tachibana K, Takeuchi M, Shime N.
    • 雑誌名

      Anaesth Crit Care Pain Med .

      巻: 42 ページ: 101281

    • DOI

      10.1016/j.accpm.2023.101281. Epub 2023 Jul 25.

    • 査読あり

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公開日: 2024-12-25  

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