| 研究課題/領域番号 |
20K09328
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
日宇 健 長崎大学, 病院(医学系), 講師 (00404260)
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| 研究分担者 |
伊木 勇輔 長崎大学, 病院(医学系), 医員 (00772154) [辞退]
定方 英作 長崎大学, 病院(医学系), 助手 (10772139)
堀江 信貴 広島大学, 医薬下顎研究科 (医), 教授 (70380912)
松尾 孝之 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (00274655)
馬場 史郎 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (30530430)
氏福 健太 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 助教 (20437867)
平山 航輔 長崎大学, 病院(医学系), 医員 (00896326)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | Stem cells / Ischemic stroke / BBB opening |
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| 研究実績の概要 |
①神経幹細胞をperi-infarct areaへ定位的脳実質内投与を行った。ヒト由来幹細胞を用いてperi-infarct areaへの定位的脳実質内投与を行う。梗塞1週間後にヒト神経幹細胞を患側大脳皮質に定位移植(1×105 cells/site, 3-4 sites)し、1週毎に機能評価を行った。Cylinder test、whisker-paw test、神経学的評価をmodified Neurological Score Testにて行い１週毎ごとに評価し定位移植3週-4週間後に細胞移植群で機能回復を来した。幹細胞移植後１か月目に脳組織を摘出。脳組織は等間隔に8切片をセレクトし、Cresyl Violet溶液を用いて染色を行い脳室サイズや脳皮質の萎縮の定量（脳梁の厚さ）を行った。②ラットに中大脳動脈閉塞モデルを作成し適切な梗塞巣をもつモデルを確立した。虚血24時間後にヒト脂肪細胞由来幹細胞を経動脈的に投与した。1週毎に機能評価を行った. 評価としてmodified Neurological Score Testにて行い１週毎ごとに評価しlow dose, high doseで評価を行った幹細胞移植後１か月目に3%PFA灌流固定を行い、脳組織を摘出。脳組織はcryostatを用いて40μm sliceを作成。等間隔に8切片をセレクトしCresyl Viole溶液を用いて染色を行い脳室サイズや脳皮質の萎縮の定量（脳梁の厚さ）を行った。mNSSはADSC投与群でday5～day29に有意な改善が得られた。High dose群とlow dose群間では有意差はなかった。体重に関しては有意差は見られなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
mNSSはADSC投与群でday5～day29に有意な改善が得られた。以上の結果が得られたものの、今後免疫染色での検討を要する。
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| 今後の研究の推進方策 |
クラシルバイオレットでの脳梗塞巣を対側との比でimage Jで計測しventricle size の測定予定である。免疫染色としてIba-1、Musashi/GFAP、RECA-1で評価を予定している。VEGFやBDNF、TNFαなどのangiogenesis、neurogenesisについても評価する。発展的にはmRNA/LNP製剤の開発を視野に脳へのmRNAの部位・細胞選択的送達法の確立を計画している。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初予定していた免疫染色が実施できず、必要な試薬の購入を見送ったため。次年度には、免疫染色の実験に必要な物品（試薬）等の購入に使用予定である。
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