| 研究課題/領域番号 |
20K09353
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
松田 良介 奈良県立医科大学, 医学部, 学内講師 (60453164)
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| 研究分担者 |
中村 光利 奈良県立医科大学, 医学部附属病院, 研究員 (00305715)
中澤 務 奈良県立医科大学, 医学部, 研究員 (00772500)
西村 文彦 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (70433331)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 膠芽腫 / NK細胞 / チェックポイント阻害 / KIR |
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| 研究実績の概要 |
2020年度に関しては、移植細胞の準備をまず開始した。ヒト膠芽腫由来細胞株U87MG (HLA-Cw5)、T98G (HLA-Cw4/Cw7)を用い、2つの細胞株は10%FBS含有DMEM培地にて37℃、5％CO２、湿度100％の環境で培養を行った。NK細胞の分離培養は、健常人末梢血よりLymphoprepを用いた比重遠心分離法によって単核細胞を分離する。CD3 depletion kit (STEMCELL Tech社)を用いてCD3陽性細胞を除去し、高濃度IL-2とIL-18を含む含有AIM-V培地にて培養を行った。以降、細胞の増幅培養に際してはIL-2含有AIM-V 培地にて増幅培養を行った。
治療用抗体の準備としては、抗KIR抗体はCreative Biolabs社製のRecombinant Human Anti-KIR2DL1 Antibody (1-7F9)を購入した。
次に、GBM細胞株とNK細胞/抗KIR抗体の共培養実験を行った。
各種GBM細胞株とNK細胞を抗KIR抗体存在下および非存在下で共培養し増殖抑制効果を解析した。 解析にはRTCA S16 (ATCA社) を使用しリアルタイムでGBM細胞の増殖をモニタリングする。 またその培養上清を用いてTNFやINFγをはじめとしたサイトカイン産生をELISA法やCBA (Cytometric beads array)法を用いて測定した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
膠芽腫細胞株の培養、ＮＫ細胞の分離培養は、計画通りに遂行できている。
また膠芽腫細胞株とＮＫ細胞、抗KIR抗体存在下ので影響を確認中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
In vitroでの実験結果の解析を行い、その結果を踏まえて、膠芽腫細胞株移植NOGマウスの作製とNK細胞/抗KIR抗体薬の投与及び腫瘍形成能の評価を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
各種実験備品を購入したが端数として335円が残額となったため、次年度で使用予定である。
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