| 研究課題/領域番号 |
20K09386
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| 研究機関 | 山梨大学 |
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研究代表者 |
吉岡 秀幸 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (20402076)
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| 研究分担者 |
木内 博之 山梨大学, 大学院総合研究部, 教授 (30241623)
八木 貴 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (90345702)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 脳虚血耐性 / 虚血性神経細胞障害 / ミトコンドリア細胞間移動 |
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| 研究実績の概要 |
細胞の生と死の両面を司るミトコンドリアは、虚血性神経細胞障害において中心的な役割を担う。近年、このミトコンドリアが細胞間を移動し、ミトコンドリア機能や細胞間情報を伝達することが明らかとなってきているが、その役割は脳虚血病態では解明されていない。一方、虚血耐性は、軽微な虚血によるpreconditioningが引き続く致死的負荷に対する抵抗性を獲得する現象である。Preconditioning後に神経細胞やアストロサイトなどから放出される情報伝達物質が、神経細胞の虚血耐性獲得へ寄与すると考えられているが、虚血耐性現象におけるミトコンドリア細胞間移動の役割は検討されていない。
本年度はマウス一過性中大脳動脈閉塞での脳虚血耐性モデルを確立した。虚血モデルは雄性C57Bl/6マウスを用い、先端をコーティングした6-0ナイロン糸を挿入し作成した。15分間虚血によるpreconditioningにより、60分間の致死的虚血への耐性が得られた。ミトコンドリアは、tunneling nanotube (TNT)と呼ばれる細胞間を連結するナノチューブを介して細胞間移動するが、現在、細胞膜のwheat germ agglutinin染色によりTNTを検出し、またミトコンドリアをMito tracker染色で検出し、preconditioning刺激がミトコンドリア細胞間移動に与える影響を検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
マウスでの虚血耐性モデルが確立された。本モデルのサンプルを用い、現在ミトコンドリア細胞間移動を免疫組織化学的に解析している。同時にin vitroでの検討も進める予定だが、in vitro虚血モデルの安定が遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
In vivoマウス脳虚血モデルでは、TNTの解析の他、mito tracker染色によるミトコンドリア観察を行う。また、ミトコンドリア細胞間移動に関与するMiro1についても免疫組織化学的に解析を進めていく予定である。In vivoモデルが確立されれば、培養液内細胞外放出ミトコンドリアの観察を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞培養系での実験の進行が遅れており、これに必要な試薬などは、次年度に使用する予定である。
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