| 研究課題/領域番号 |
20K09421
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| 研究機関 | 産業医科大学 |
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研究代表者 |
鈴木 仁士 産業医科大学, 医学部, 講師 (80644880)
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| 研究分担者 |
上田 陽一 産業医科大学, 医学部, 教授 (10232745)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | バゾプレッシン / トランスジェニックラット / 神経障害性疼痛 |
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| 研究実績の概要 |
令和2年度は、バゾプレッシン（AVP）を改変緑色蛍光タンパク（eGFP）で標識したAVP-eGFPトランスジェニック（Tg）ラットを用いて神経障害性疼痛モデルラットにおけるAVPの発現動態の評価を行なった。雄性7週齢のAVP-eGFP Tg ラットの左側第5腰髄（L5）神経を結紮し、脊髄神経結紮損傷(spinal nerve ligation, SNL)モデルを作成した。対照群は無処置群および偽手術群とした。処置前、処置後7日および14日の機械刺激および温刺激に対する痛覚閾値を評価した。処置後7日および14日に、SNL群は対照群と比較し有意な痛覚閾値の低下を認めた。処置後7日および14日後に灌流固定を行い、脳、下垂体および脊髄を摘出した。ミクロトームを用いて脳および脊髄の30μmの切片を作成した。イメージアナライザーを用いて視索上核(SON)、室傍核(PVN)、正中隆起(ME)および下垂体後葉(PP)のAVP-eGFP輝度を測定した。処置後7日および14日でSON、PVN、ME、およびPPにおいてSNL群のAVP-eGFP輝度は対照群と比較して有意に上昇した。脊髄切片を用いて、GFAP(アストロサイトの指標)およびIba-1(ミクログリアの指標)に対する免疫組織化学的染色(IHC)を行い、L5患側脊髄後角I-II層におけるGFAPおよびIba-1陽性細胞の赤色蛍光輝度を測定した。処置後7日および14日でSNL群のGFAPおよびIba-1陽性細胞の赤色蛍光輝度は対照群と比較し有意に上昇し、L５腰髄神経結紮で神経障害性疼痛が生じたことに伴い、アストロサイトおよびミクログリアが活性化している事を確認した。続いて、同ラットを用いてSNLモデルおよび対照群を作成し、処置後14日に断頭した。その際に血液を採取し、血中AVP濃度を測定した。SNL群と対照群で明らかな有意差を認めなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
令和２年度はAVP-eGFP Tg ラットを用いて神経障害性疼痛モデルを作成し、視床下部SONおよびPVNにおいてAVPニューロンが活性化されていることを確認した。また、SNLモデルの脊髄後角におけるアストロサイトやミクログリアも活性化されていることが確認できた。当初予定していた神経障害性疼痛モデルであるSNLモデルの作成が確立され、視床下部AVPニューロンの活性化や脊髄後角アストロサイトやミクログリアの活性化が確認されたため、現段階では概ね順調に進展していると考えられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
次年度（令和３年度）は、凍結脳切片を用いたin situハイブリダイゼーションを行い、視床下部SONおよびPVNにおけるAVP mRNAおよびeGFP mRNAレベルの定量評価を行う。続いて、AVP-hM3Dq-mCherry Tg ラットを用いて、神経障害性疼痛モデルラットのAVPニューロンを強制的に活性化させた際の痛覚閾値の評価を行う予定としている。
本研究の成果は、日本生理学会、日本整形外科学会などの国内学会および国際学会に発表を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
コロナの影響により、研究室の立ち入り制限等で計画的に使用できなかった。
昨年度未使用分については共用備品や、試薬等を購入する予定である。
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