2020 年度実施状況報告書

スフェロイド型脂肪由来幹細胞による関節炎抑制メカニズムの解明

研究課題

研究課題/領域番号	20K09486
研究機関	大阪市立大学
研究代表者	岡野匡志大阪市立大学, 大学院医学研究科, 病院講師 (50754826)
研究分担者	折田久美大阪市立大学, 大学院医学研究科, 博士研究員 (40748597)
研究期間 (年度)	2020-04-01 – 2023-03-31
キーワード	脂肪由来幹細胞 / 関節リウマチ / 抗炎症作用 / 組織修復 / 関節炎
研究実績の概要	脂肪由来幹細胞は同種脂肪細胞より幹細胞を分離培養したものであり、抗炎症効果および組織修復能があると報告されている。関節リウマチなどの慢性関節炎疾患における不可逆的な関節破壊を抑制するため、最近では特定の炎症性サイトカインをターゲットにした生物学的製剤の全身投与による治療が行われるが、副作用や合併症があるために使用できない患者も多く存在する。これらの観点から、試薬の局所投与にて比較的安全に高い関節炎の抑制効果を得られる方法が実臨床においては重要である。本研究の目的は、脂肪由来幹細胞の関節内局所投与の慢性関節炎に対する有効性ならびに安全性、そして抗炎症作用の分子細胞学的な探索を行う事である。脂肪由来幹細胞単独、および脂肪由来幹細胞の各種スフェロイド(接着型と浮遊型)によるアポトーシスに差があるかの確認を行ってるが、単一細胞と各種スフェロイドで生存期間には差があり、スフェロイドでのアポトーシスが抑制されていることを確認している。今後ELISA 法を用い、培地中へ放出するサイトカイン発現量の測定を実施する。特に、抗炎症性サイトカインや炎症性サイトカインおよび骨代謝に関与するといわれるサイトカインなどの発現量を定量的に評価する。さらに、単一細胞、各種スフェロイドにおける遺伝子発現の確認をPCRにて行い、最も抗炎症効果の高い形態を検証する予定である。さらに、各種脂肪由来幹細胞のヒト炎症性滑膜細胞への抗炎症能を検証する。精製した脂肪由来幹細胞単一細胞もしくは各種スフェロイドがリウマチ患者から採取した滑膜をisolationしたヒト滑膜細胞に対する影響を各脂肪由来幹細胞治療群と無治療群で比較し、検討する予定である。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由脂肪由来幹細胞の精製とその細胞発現が確認でき、脂肪由来幹細胞の各種スフェロイド(接着型と浮遊型)による培養作製方法も確立できた。そしてその培養した脂肪由来幹細胞単一細胞及び、各種スフェロイドにおいて、Apoptosis Assay kitを用い、アポトーシスの確認を行えているため。
今後の研究の推進方策	今後ELISA 法を用い、培地中へ放出するサイトカイン発現量の測定を実施する。特に、抗炎症性サイトカインや炎症性サイトカインおよび骨代謝に関与するといわれるサイトカインなどの発現量を定量的に評価する。さらに、単一細胞、各種スフェロイドにおける遺伝子発現の確認をPCRにて行い、最も抗炎症効果の高い形態を検証する予定である。さらに、各種脂肪由来幹細胞のヒト炎症性滑膜細胞への抗炎症能を検証する。精製した脂肪由来幹細胞単一細胞もしくは各種スフェロイドがリウマチ患者から採取した滑膜をisolationしたヒト滑膜細胞に対する影響を各脂肪由来幹細胞治療群と無治療群で比較し、検討する予定である。