| 研究課題/領域番号 |
20K09601
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
末岡 幸太郎 山口大学, 医学部附属病院, 准教授 (40452643)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 子宮体癌 / 有機シリカ・ナノ粒子キャリア / CRB1 |
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| 研究実績の概要 |
令和3年までに蛍光色素（ローダミンB）を内包させた OS/TNC を作成し、これを子宮体癌細胞株であるSNGMに導入し、OS/TNC のがん細胞への取込（ローダミンB を指標とした蛍光観察）の条件設定を行った。次に導入遺伝子の発現をモニタリングするため、CBR1と同時に GFPを発現する発現ベクターを共導入し、導入の条件検討を行った。 その結果、OS/TNC はがん細胞に高率に導入され、継代後も維持されることがわかった。しかし、目的とするCRB1の発現はほとんど見られなかった。その原因として、 OS/TNCの細胞質への移行あるいは発現ベクターの核移行が生じていない、あるいは発現ベクターが OS/TNCから乖離していない可能性が考えられた。
これまでCRB1-OS/TNCの作成はOS/TNC にCBR1発現ベクターを付加させるために、初めにOS/TNCとポリエチレンイミン(PEI)の複合体にCBR1ベクターを導入していた。これをまずCBR1発現ベクターとPEIの複合体を作成したのちに、OS/TNCに付加する方法に変更した。GFPによる導入の確認を行うとこれまでと同様に細胞への導入は成功していた。しかしさらに検討を進めると、 OS/TNCに結合していない遊離CBR1発現ベクター＋PEI複合体は細胞株に直接導入されている可能性も見出された。
したがって目的とするCBR1の発現はほとんど見られなかったため、研究は遅れている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
蛍光色素（ローダミンB）を内包させた OS/TNC を作成し、これを子宮体癌細胞株であるSNGMに導入できた。次に目的とするCBR1と同時に GFPを発現する発現ベクターを共導入し、CBR1付加OS/TNC を子宮体癌細胞株に導入できた。しかし、目的とするCBR1の発現はほとんど見られなかったため、研究は遅れている。
原因の究明を行い、 OS/TNCの細胞質への移行あるいは発現ベクターの核移行が生じていない、あるいは発現ベクターが OS/TNCから乖離していない可能性を考えた。これまでCRB1-OS/TNCの作成はOS/TNC にCBR1発現ベクターを付加させるために、初めにOS/TNCとポリエチレンイミン(PEI)の複合体にCBR1ベクターを導入していた。これをまずCBR1発現ベクターとPEIの複合体を作成したのちに、 OS/TNCに付加する方法に変更した。GFPによる導入の確認を行うとこれまでと同様に細胞への導入は成功していた。しかしさらに検討を進めると、 OS/TNCに結合していない遊離CBR1発現ベクター＋PEI複合体は細胞株に直接導入されている可能性も見出された。したがって今のところ、研究を進めることができていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
リポフェクションのような市販されている導入試薬を使用したトランフェクションを行って、CBR1が発現する、遺伝子導入の方法を検討する。
これができれば、CBR1高発現の細胞株で、in vitroならびにin vivoでの機能解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度は遺伝子導入が成功し、in vitro、in vivo実験により遺伝子導入細胞の機能解析を行う予定であったが、遺伝子導入が成功していないため、未使用額が大きくなった。
今後はCBR1の発言株の作成に取り組む条件設定を探求する。それが成功すれば、ヌードマウスに移植するモデルを作成し、腫瘍形成を検討するin vivo実験まで行いたいと考えている。
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