| 研究課題/領域番号 |
20K09717
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| 研究機関 | 大分大学 |
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研究代表者 |
鈴木 正志 大分大学, 医学部, 教授 (60211314)
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| 研究分担者 |
平野 隆 大分大学, 医学部, 講師 (20305056)
川野 利明 大分大学, 医学部, 助教 (30633424)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | PDL-1 / 免疫老化 / インフルエンザ菌 / 上気道 / 粘膜免疫 |
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| 研究実績の概要 |
１年齢BALB/cマウスを用いて検討を行った。対照マウスとして１年齢マウス（n＝5）に、インフルエンザ菌由来外膜蛋白(OMP)を粘膜アジュバントのコレラトキシンとともに経鼻投与を週１回、計３回施行した。抗PDL-1抗体投与群も同様に経鼻投与を週１回、計３回施行しているが、経鼻投与開始前１日前と経鼻投与後３日後に抗PDL-1抗体250μgを腹腔内投与している。各群から中耳骨胞、鼻粘膜組織、鼻粘膜関連リンパ組織（NALT）、肺、頚部リンパ節から単核球を採取し解析を行った。得られた試料は、T細胞およびB細胞の解析を行うため、 FITC標識抗B220および抗CD3抗体、BV421標識抗CD4抗体、PE-Cy7標識抗CD19およびCD62L抗体、PE標識抗CD44抗体、APC標識抗CD22抗体にて染色を行い、フローサイトメトリーによるTおよびB細胞分画の解析を行った。上気道粘膜組織においては、PDL-1抗体投与によりヘルパーT細胞が増加し、ヘルパーT細胞分化ではエフェクターT細胞が増加していた。リンパ組織においてはPDL-1抗体投与により、粘膜組織同様にエフェクターT細胞が増加し、メモリーT細胞が減少した。しかし、上気道粘膜組織において、B細胞分化では投与有無における差は明らかではなく、リンパ組織において成熟B細胞の減少を軽度のみ認めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
PD-L1抗体による上気道の粘膜免疫応答の関与について、今回はB細胞中心に解析を行うことが可能であった。今回、B細胞系への免疫応答については、PD-L1のB細胞分化への直接的影響よりも、T細胞系の関与が示唆されており、今後の検討に大きな示唆が得られた。
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| 今後の研究の推進方策 |
BALB/cマウスを用いて、中耳粘膜、鼻粘膜組織（関連リンパ組織含む）、肺臓、頸部リンパ節、脾臓を採取し、上記組織において、コラゲネース処理や比重遠沈法などにより単核球を採取して、CD4、CD8陽性T細胞においてCD69、CD25などのリンパ球活性化マーカーにてCD4陽性Tリンパ球、B220陽性B細胞、CD11b陽性顆粒球、CD11c陽性樹状細胞などの活性化について解析し、CD279によりPD-1の発現レベルについても検討を加える。セルソーターを用いて各臓器よりT細胞分離後にRNAを抽出し、innate and adaptive immune responses PCR arrayを施行し、Tリンパ球のカスケードをRNAレベルから解析し、免疫応答でのカスケードの解明および細胞内シグナル伝達の解析を行い、抗CTLA-4抗体、抗PDL－１抗体投与後の免疫誘導の変化した因子について解明する
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| 次年度使用額が生じた理由 |
購入を検討していた物品が購入できず、次年度に繰り越しとした。今後はその他の物品に使用を検討する。
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