| 研究課題/領域番号 |
20K09837
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| 研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
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研究代表者 |
高木 均 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (70283596)
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| 研究分担者 |
北岡 康史 聖マリアンナ医科大学, 医学研究科, 教授 (10367352)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 糖尿病網膜症 / 血管新生 |
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| 研究実績の概要 |
今回検討するNorrin、Fz4、Tspan12、Lrp5の抑制はNorrie病やFEVR患者のみならず遺伝子ノックアウトマウスにおいても血管の伸展障害や脆弱血管の形成から増殖網膜症に進行する。我々が標的とする糖尿病網膜症や脈絡膜新生血管などに見られる血管の未成熟化や増殖などの血管病態と酷似する部分が多い。従ってその分子の発現やシグナル伝達機構の異常を同定することで全く新しい病態メカニズムの解明と治療法開発につながることが予想され着想に至った。
そこでNorrin /Frizzle4/ Lrp5/Tspan12系に焦点をあて、HUVECにおける高血糖状態、低酸素状態におけるRNAシークエンスデータ、そしてマイクロアレイデータで関連遺伝子群を検討した。
グルコース5.5.mMと50mM（高血糖）と比較したRNAシークエンスのデータから、TSPAN12は0.96(High glucose/Low glucose)、FZD4は1.11、LRP5は0.85で有意に上昇や低下を認めているものはなかった。また、NDPはFPKM0.5以下であり、HUVECにおける発現量はかなり低いと考えられた。
Hypoxia condition(O2 0.5%)におけるマイクロアレイデータ(GSE35932)においてもTSPAN12は0.91(Hypoxia /Normoxia)、FZD4は0.73で優位に上昇や低下を認めているものはなかった。
HUVECにH2O2を投与したコンディションでのマイクロアレイデータ（GSE104664）でも検討したが、FZD4 1.29 (H2O2 / control), LRP5 1.54, TSPAN12 1.23と大きな変化はしていなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
高血糖、低酸素、H2O2でのトランスクリプトーム解析での変化は認められず、今回までのデータでは我々の仮設を立証することはできなかった。今後はsiRNA（Norrin、Fz4、Tspan12、Lrp5）を用いて内皮細胞、周皮細胞の細胞接着の状態などを検討していく。
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| 今後の研究の推進方策 |
siRNAを用い、Norrin、TSPAN12、FZD4、LRP5をノックダウンさせた状態でTEER（経上皮電気抵抗）測定やOccludin、VE-Cadherinなどの免疫染色などを行い、糖尿病網膜症において重要である細胞接着分子への影響を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
試薬、実験消耗品等が研究室で以前から使用しているものを優先して使用したため予定より経費が抑えられたため。今後は siRNA、免疫染色に必要な試薬等の購入をする予定である。
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