| 研究実績の概要 |
CRISPR/Cas9 systemによってOpn3-KOヒト褐色脂肪細胞を3種類のguide RNAを用いて作成した(sg1-, sg2-, sg3-Opn3-KO cell)。このOpn3-KOヒト褐色脂肪細胞と野生型ヒト褐色脂肪細胞を用いて、RNA-seq解析を行ったところ種々の遺伝子変動が認められている、ミトコンドリア活性、脂質合成、脂質分解、糖取り込みの機能を調べるための実験・解析を行った。まず、KO細胞のOpn3のゲノム変異の部位および頻度を確認し、さらにOpn3タンパク発現の減少を確認した。Opn3タンパク発現が最も低下していたsg1-Opn3-KO cellsを用いて褐色脂肪細胞機能マーカーであるucp1, PGC1a, Dio2の遺伝子発現を確認したところ、発現増加傾向にあった。さらに、タンパク測定を行ったろころ、ucp1, PRDM16, Glut1タンパクのの発現増加が見られた。このことからOpn3-KOにより褐色脂肪細胞の機能が活性化されている可能性が示唆される。さらに、これらのKO細胞は様々な遺伝子変異が入っている種々の細胞の集団であるため、クローン細胞を9種類樹立した。これらを用いて脂肪細胞分化能を確認後、機能解析実験を行う。さらに、Opn3-KOヒト褐色脂肪細胞にOpn3を過剰発現させるレスキュー実験に用いるためのヒトOpn3発現プラスミドを作成した。これを用いたOpn3-KOヒト褐色脂肪細胞への遺伝子導入およびstable発現株の作成に向けた準備を行なっている。
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