CCN２の転写因子様機能を介した線維症のキープレイヤー筋線維芽細胞分化機構の解明

2023 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20K09889
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 西田 崇 岡山大学, 医歯薬学域, 准教授 (30322233)
• 研究分担者: 滝川 正春 岡山大学, 医歯薬学域, 教授 (20112063) ; 久保田 聡 岡山大学, 医歯薬学域, 教授 (90221936) ; 服部 高子 岡山大学, 医歯薬学域, 助教 (00228488) ; 青山 絵理子 岡山大学, 医歯薬学域, 助教 (10432650) ; 高江洲 かずみ (河田かずみ) 岡山大学, 医歯薬学域, 助教 (10457228)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2024-03-31
• キーワード: CCN2 / PU.1 / 線維化 / 筋線維芽細胞 / イントラクリン作用

研究実績の概要

線維性疾患のキープレイヤーとして重要な役割を担う筋線維芽細胞はI型コラーゲンやα-SMAを産生することが知られている。しかし、その分化メカニズムは未だ明らかにされていない。本研究課題の目的は、核移行シグナル様の配列を持つCellular communication network factor 2 (CCN2)が線維化細胞の核内に移行するのか、そしてもし核内に移行するのであれば、それが筋線維芽細胞への分化にどのように関わっているのかを明らかにすることにある。当該年度は、これまで得られた研究成果を検証し、論文投稿を行った。以下に論文要旨を示す。1. シグナルペプチドを欠失したCCN2発現プラスミド(Sp-Ccn2)あるいは全長のCCN2発現プラスミド(Sp+Ccn2)をNIH3T3細胞に遺伝子導入した結果、Sp-Ccn2を遺伝子導入した細胞ではCCN2の核移行は見られなかったが、Sp+Ccn2を遺伝子導入した細胞では、一部のCCN2が核へと移行した。2. Sp-Ccn2あるいはSp+Ccn2を遺伝子導入したNIH3T3細胞において、筋線維芽細胞分化に重要な転写因子であるPU.1 (Spi1)の遺伝子発現レベルがSp+Ccn2を遺伝子導入した群で有意に上昇した。また、α-SMAの遺伝子発現レベルも有意に上昇した。3. CCN2がPU.1プロモーター上に結合することをクロマチン免疫沈降PCR法及びゲルシフトアッセイで確認した。4. CCN2とPU.1との物理的な結合を免疫沈降-Western blot法で明らかにした。5. CCN2はCCN2プロモーター上にも結合し、Sp+Ccn2とSpi1の発現プラスミドをNIH3T3細胞に共発現させたところ、Ccn2の遺伝子発現レベルが著明に上昇した。

研究成果

• [雑誌論文] Dual roles of cellular communication network factor 6 (CCN6) in the invasion and metastasis of oral cancer cells to bone via binding to BMP2 and RANKL. (2023)
  • 著者名/発表者名: Hochi, H., Kubota, S., Takigawa, M., Nishida, T.
  • 雑誌名: Carcinogenesis 巻: 44 ページ: 695-707
  • DOI: 10.1093/carcin/bgad057
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Expression and function of CCN2-derived circRNAs in chondrocytes. (2023)
  • 著者名/発表者名: Kato, S., Kawata, K., Nishida, T., Mizukawa, T., Takigawa, M., Iida, S., Kubota, S.
  • 雑誌名: J Cell Commun Signal 巻: 17 ページ: 1501-1515
  • DOI: 10.1007/s12079-023-00782-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Do not overwork: cellular communication network factor 3 for life in cartilage. (2023)
  • 著者名/発表者名: Kubota S, Kawaki H, Perbal B, Takigawa M, Kawata K, Hattori T, Nishida T.
  • 雑誌名: J Cell Commun Signal 巻: 17 ページ: 353-359
  • DOI: 10.1007/s12079-023-00723-4.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Novel cell biological assays for measuring bone remodeling activities of CCN proteins. (2023)
  • 著者名/発表者名: Nishida T, Kubota S, Takigawa M.
  • 雑誌名: Methods Mol Biol. 巻: 2582 ページ: 255-268
  • DOI: 10.1007/978-1-0716-2744-0_17.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 軟骨細胞における核内CCN2の生理的役割 (2024)
  • 著者名/発表者名: 西田 崇、長尾有里香、滝川正春、久保田聡
  • 学会等名: 第36回日本軟骨代謝学会
• [学会発表] Expression and function of CCN2-derived circRNAs in chondrocytes. (2023)
  • 著者名/発表者名: Kato, S., Kawata, K., Nishida, T., Muzukawa, T., Takigawa, M., Iida, S., Kubota, S.
  • 学会等名: 第46回日本分子生物学会
• [学会発表] 軟骨細胞におけるCCN2由来環状RNAの探索とその機能 (2023)
  • 著者名/発表者名: 加藤壮真、河田かずみ、水川朋美、西田 崇、久保田聡:
  • 学会等名: 第35回日本軟骨代謝学会
• [学会発表] 線維化におけるCCN2の転写共役様因子としての作用。 (2023)
  • 著者名/発表者名: 西田 崇、辰川ひなた、滝川正春、久保田聡
  • 学会等名: 第55回日本結合組織学会
• [学会発表] 軟骨細胞におけるCCN2の核移行の意義 (2023)
  • 著者名/発表者名: 西田 崇、滝川正春、久保田聡:
  • 学会等名: 第14回日本CCNファミリー研究会
• [学会発表] 軟骨細胞におけるCCN2由来circRNAの発現とその機能の検証 (2023)
  • 著者名/発表者名: 加藤壮真、河田かずみ、西田 崇、水川朋美、滝川正春、 飯田征二、久保田聡
  • 学会等名: 第14回日本CCNファミリー研究会
• [学会発表] CCN6はBMP2による口腔がん細胞の上皮・間葉転換をコントロールする (2023)
  • 著者名/発表者名: 芳地浩彰、久保田聡、滝川正春、西田 崇
  • 学会等名: 第14回日本CCNファミリー研究会
• [学会発表] 軟骨細胞におけるCCN2由来circRNAの発現とその機能の可能性 (2023)
  • 著者名/発表者名: 加藤壮真、河田かずみ、西田 崇、滝川正春、久保田聡
  • 学会等名: 第65回歯科基礎医学会
• [備考] 岡山大学歯学部口腔生化学
  • URL: https://www.okayama-u.ac.jp/user/seika/index.html