研究課題
グラム陰性桿菌Porphyromonas gingivalisは歯周病の代表的な原因菌として知られている。本菌は付着因子としてMfa1線毛を持つ。Mfa1線毛は主にMfa1タンパク質により構成されるが、その他に4つの微量成分Mfa2、Mfa3、Mfa4及びMfa5が含まれる。Mfa2は線毛基部に、Mfa3-5は線毛先端に位置すると考えられている。これまで我々は、Mfa1-5タンパク質がmfaクラスターから発現すること、mfa1 にはmfa170及びmfa153という2つの遺伝子型が存在することを明らかにしてきた。さらに本研究室では、mfa1遺伝子型が不明である12株についてゲノム解析を行い、mfa1配列を明らかにしたところ、mfa170にはさらに2つの遺伝子型(mfa170A及び mfa170B)が存在することを明らかにした。そこで令和４年度では、新規に見つかったMfa170Bに対する抗血清を作製し、２つのMfa1タンパク質間での抗原性の違いについてウェスタンブロット及びELISAにより解析した。その結果、Mfa170A及びMfa170Bタンパク質は、それぞれ異なる抗原性を持つことが示された。Mfa5にはA-Eの5つの遺伝子型が存在すること、菌株によっては先端因子mfa5に相当するvon Willebrand factor A containing protein(VWA)をタンデムに持つ株が見つかった。そこで、VWAのタンデム株であるEM3株に注目し、新たに見つかったVWAタンパク質(VWA2)に対する抗血清を作製し、線毛中におけるMfa5-2タンパク質の有無をウェスタンブロットにより確認した。その結果、EM3株において抗Mfa5-2抗血清に特異的に反応する250-kDaバンドが検出された。さらに、EM3株から精製したMfa1線毛をSDS-PAGEにより展開したところ、250 kDaに明瞭なタンパク質バンドが検出され、そのバンドを質量分析により解析したところMfa5-2に相当するタンパク質が同定された。以上の結果からMfa5-2がMfa1線毛における新規の線毛タンパク質であることが考えられた。
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