接合上皮発現タンパク質の発現制御による歯周病治療戦略

2022 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20K09945
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 小方 頼昌 日本大学, 松戸歯学部, 教授 (90204065)
• 研究分担者: 中山 洋平 日本大学, 松戸歯学部, 准教授 (30434088) ; 高井 英樹 日本大学, 松戸歯学部, 准教授 (30453898)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: 接合上皮 / アメロチン / ODAM / FDC-SP / 歯周病 / 発現制御

研究実績の概要

炎症歯周組織でのアメロチン(AMTN)およびODAMの転写調節機構を解明するため、ヒト歯肉上皮細胞（Ca9-22細胞）をTNF-α（10 ng/ml）またはIL-1β（1 ng）で刺激し、AMTNおよびODAMの遺伝子発現の変化を解析した。Ca9-22細胞をTNF-αまたはIL-1βで刺激すると、AMTNとODAMのmRNAおよびタンパク質量は12時間後に増加した。Ca9-22細胞に-353AMTN Lucコンストラクトを導入しTNF-αまたはIL-1βで12時間刺激すると転写活性は上昇した。-480塩基対上流までのODAM遺伝子プロモーターを含むLUCコンストラクトの活性は、TNF-αまたはIL-1βで12時間刺激すると上昇した。AMTN遺伝子プロモーター中のCCAAT/enhancer binding protein (C/EBP)1、C/EBP2、Yin Yang1(YY1)配列に変異を挿入すると、転写活性の上昇が部分的に抑制された。A kinase、チロシンkinase、MEK1/2およびPI3 kinase阻害剤によりLUC活性の上昇が抑制された。ゲルシフトアッセイの結果、核内タンパク質のYY1配列への結合は、TNF-α刺激3および12時間後に増加した。C/EBP2配列への結合は、IL-1β刺激6および12時間後に増加し、YY1配列への結合は6時間後に増加した。上皮細胞でのヒトAMTN遺伝子発現は、TNF-αおよびIL-1β刺激後に、上記のリン酸化シグナル伝達を介してC/EBPβとYY1転写因子のAMTNプロモーター配列への結合量を調節して行われると考えられた。ODAMのルシフェラーゼ活性は、チロシンkinase、MEK1/2およびPI3 kinase阻害剤により抑制された。IL-1βまたはTNF-αで刺激するとYY1およびC/EBP結合配列への核内タンパク質の結合が増加したことから，IL-1βとTNF-α刺激により誘導された転写因子がYY1およびC/EBP配列に結合し，ODAMの転写を調節している可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] TNF-α regulates the composition of the basal lamina and cell-matrix adhesions in gingival epithelial cells. (2022)
  • 著者名/発表者名: Mezawa M, Tsuruya Y, Yamaguchi A, Yamazaki-Takai M, Kono T, Okada H, McCulloch CA, Ogata Y
  • 雑誌名: Cell Adhesion & Migration 巻: 16 ページ: 13-24
  • DOI: 10.1080/19336918.2022.2029237
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Transcriptional regulation of human odontogenic ameloblast-associated protein gene by tumor necrosis factor-α. (2022)
  • 著者名/発表者名: Tsuruya Y, Yamaguchi A, Yamazaki-Takai M, Mezawa M, Takai H, Nakayama Y, Ogata Y
  • 雑誌名: Inflammation Research 巻: 71 ページ: 119-129
  • DOI: 10.1007/s00011-021-01523-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] Epstein-Barr Virus Promotes the Production of Inflammatory Cytokines in Gingival Fibroblasts and RANKL-Induced Osteoclast Differentiation in RAW264.7 Cells. (2022)
  • 著者名/発表者名: Yokoe S, Hasuike A, Watanabe N, Tanaka H, Karahashi H, Wakuda S, Takeichi O, Kawato T, Takai H, Ogata Y, Sato S, Imai K
  • 雑誌名: International Journal of Molecular Sciences 巻: 23 ページ: 809
  • DOI: 10.3390/ijms23020809
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Interleukin-1β regulates odontogenic ameloblast-associated protein gene transcription in human gingival epithelial cells. (2022)
  • 著者名/発表者名: Tsuruya Y, Yamaguchi A, Yamazaki-Takai M, Zhenyu J, Takai H, Nakayama Y, Ogata Y
  • 雑誌名: Odontology 巻: 110 ページ: 557-568
  • DOI: 10.1007/s10266-022-00689-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Effect of Locally Delivered Minocycline on the Profile of Subgingival Bacterial Genera in Patients with Periodontitis: A Prospective Pilot Study. Biomolecules. (2022)
  • 著者名/発表者名: Morozumi T, Nakayama Y, Shirakawa S, Imamura K, Nohno K, Nagano T, Miyazawa H, Hokari T, Takuma R, Sugihara S, Gomi K, Saito A, Ogata Y, Komaki M
  • 雑誌名: Biomolecules 巻: 12 ページ: 719
  • DOI: 10.3390/biom12050719
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Study protocol for periodontal tissue regeneration with a mixture of autologous adipose-derived stem cells and platelet rich plasma: A multicenter, randomized, open-label clinical trial. (2022)
  • 著者名/発表者名: Tobita M, Masubuchi Y, Ogata Y, Mitani A, Kikuchi T, Toriumi T, Montenegro Raudales JL, Mizuno H, Suzuki Y, Wakana K, Yoneda H, Kamijo R, Kino-Oka M, Morio T, Okada K, Murakami S, Honda M
  • 雑誌名: Regenerative Therapy 巻: 21 ページ: 436-441
  • DOI: 10.1016/j.reth.2022.09.008
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Inflammatory Cytokines Stimulate Exosomal MicroRNA and Protein Expressions in Osteoblast-like Saos2 Cells. (2022)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi A, Tsuruya Y, Zhenyu J, Yamazaki-Takai M, Takai H, Nakayama Y, Ogata Y
  • 雑誌名: Journal of Oral-Medical Sciences 巻: 21 ページ: 1-7
  • DOI: 10.5466/ijoms.21.1
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Tumor necrosis factor-α regulates exosomal miRNA and protein expressions in human gingival fibroblasts. (2022)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi A, Takai H, Nakayama Y, Ogata Y
  • 雑誌名: Journal of Oral-Medical Sciences 巻: 21 ページ: 32-38
  • DOI: 10.5466/ijoms.21.32
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Suppression of bone-related transcription factors by TNF-α and IL-6 reduced alkaline phosphatase activities in osteoblast-like Saos2 cells. (2022)
  • 著者名/発表者名: Takai H, Kitazawa, T, Ogata Y
  • 雑誌名: Journal of Oral-Medical Sciences 巻: 21 ページ: 39-45
  • DOI: 10.5466/ijoms.21.39
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Association between dietary habit and clinical parameters in patients with chronic periodontitis undergoing supportive periodontal therapy. (2022)
  • 著者名/発表者名: Tabe S, Nakayama Y, Kobayashi R, Oyama K, Kitano D, Ogihara J, Senpuku H, Ogata Y
  • 雑誌名: Nutrients 巻: 14 ページ: 4993
  • DOI: 10.3390/nu14234993
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 骨補填材の使用により獲得した新生骨中の骨関連転写因子の発現 (2022)
  • 著者名/発表者名: 北澤伊、高井英樹、小方頼昌
  • 学会等名: 第65回秋季日本歯周病学会
• [学会発表] SPT期慢性歯周炎患者臨床パラメーターに反映する栄養因子の検討 (2022)
  • 著者名/発表者名: 田部進市，中山洋平，小林良喜，大山勝徳，北野大輔，荻原淳，泉福英信，小方賴昌
  • 学会等名: 第65回秋季日本歯周病学会
• [学会発表] 歯周基本治療が唾液中のエクソソーム内の成分に及ぼす影響 (2022)
  • 著者名/発表者名: 山口亜利彩，五十嵐一馬，金振宇，鶴屋祐人，高井瑞穂，高井英樹，中山洋平，小方賴昌
  • 学会等名: 第65回秋季日本歯周病学会
• [学会発表] IL-6によるヒトODAM遺伝子の転写調節機構の解析 (2022)
  • 著者名/発表者名: 金振宇，鶴屋祐人，山口亜利彩，五十嵐一馬，高井瑞穂，高井英樹，中山洋平，小方賴昌
  • 学会等名: 第65回秋季日本歯周病学会
• [学会発表] C/EBPおよびYY1を介した炎症性サイトカインによるODAM遺伝子発現の転写調節 (2022)
  • 著者名/発表者名: 鶴屋祐人，五十嵐一馬，金振宇，山口亜利彩，高井瑞穂，高井英樹，中山洋平，小方賴昌
  • 学会等名: 第65回秋季日本歯周病学会
• [学会発表] Analysis of the involvement of BSP in periodontal tissue regeneration and the role of amelotin, ODAM and FDC-SP expressed in the junctional epithelium in the periodontal tissue (2022)
  • 著者名/発表者名: Ogata Y
  • 学会等名: The 62nd General Session of Korean Academy of Periodontology