| 研究課題/領域番号 |
20K09979
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
神尾 直人 日本大学, 松戸歯学部, 助教 (10508774)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 歯髄 / 炎症 / CXCR4 / MIF |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、歯髄炎症時もしくは象牙芽細胞へ分化する過程におけるC-X-C motif chemokine receptor (CXCR)4の機能について検索するものである。特に歯髄においては炎症とそれに対する防御としての石灰化との間には密接な関係があり、その機能の解析の一助として、まず炎症性サイトカインや、炎症性メディエーターによる刺激時のCXCR4の発現について歯髄培養細胞を用いて検索した。その結果、リアルタイムPCR・細胞蛍光免疫染色にて、IL-1bやブラジキニンが、刺激後数日でｍRNAおよびタンパク質発現を上昇させることを見出した。続けて現在ウェスタンブロット法にて検索中である。また、ウエスタンブロット法では石灰化誘導培地やPGE2の影響もしくはCXCL-12発現についても検索しているが、分化時における発現状況に今のところ差がみられていない。種々条件を変更し、継続して検討を行う。しかしながらCXCR4自体は染色されているのを確認できているため、つづけてその発現が炎症の拡大に寄与するものなのか、分化誘導に寄与するものなのかを検討していく。
CXCR4リガンドであるCXCL-12による影響も検索している。すなわち、CXCL-12刺激によりCXCL-12やMIFとの相互作用が存在するか否か、もしくはシグナル伝達過程の差異の検索である。他の細胞で報告されるような、細胞内カルシウムイオン濃度の変化が今のところ見られていないが、種々条件を変えて検索中である。COX-2の発現の変化はMIF同様にみられるようだが、ウエスタンブロットで有意な差が出ているとはいいがたい。続けて遺伝子発現も同様に検討中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
炎症性サイトカインによる刺激でCXCR4遺伝子発現と免疫染色ではデータを得ているが、ウェスタンブロットのデータを得るのに苦慮し、進行が遅れていると言える。
また、CXCL-12刺激では細胞内カルシウムイオン濃度の変化がみられなかったが、他のポジティブコントロールにおいても動向が不安定で、明確な結果が出ているとはいいがたく先に進めない部分があるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
現在行っている手技に対しては成否を検討しながらも継続する。特に細胞蛍光免疫染色で出ているデータはウエスタンブロットに反映できると考えている。
続けて、NestinやDSPPなどの象牙芽細胞マーカーの発現との関係性も確認する。また、MIF・CXCL-12による刺激が歯髄細胞石灰化に与える影響をALP活性測定、Alizarin Red染色にて観察する予定としている。結果が思わしくない場合は、CXCL-12によるCOX-2発現に対するシグナル伝達機構の解明にシフトすることも検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型ウィルスの影響により、学会参加費・旅費として計上した予算が未使用になった。残金はウシ胎児血清の一括購入費に充てる。
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