| 研究課題/領域番号 |
20K10083
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| 研究機関 | 大阪歯科大学 |
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研究代表者 |
川本 章代 大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (50368156)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | エクソソーム / 歯肉溝滲出液 / miRNA |
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| 研究実績の概要 |
慢性歯周炎患者、ならびに慢性歯周炎と糖尿病を併発する患者の、上顎前歯を防湿後、歯肉溝にペリオペーパーを挿入し、染み出た浸出液を歯肉溝滲出液として採取した。血液の混入したペリオペーパーは取り除いた。慢性歯周炎は、歯周ポケット深さ、プロービング時の出血、歯の動揺度の測定から診断した。回収したペリオペーパーは、解析まで－８０度にて保存した。
解析には、ペリオペーパーを取り除き遠心後、Total Exosome Isolationを全液量の半分量入れ、SUPERaseInRNase Inhibitorを追加し、vortex後、１時間４度で静置、その後、遠心しエクソソームの抽出した。
エクソソームの存在を確認するために、ELISA、粒子径測定ならびにエクソソーム観察を実施した。すなわち、エクソソーム表面に存在しているCD9/CD63を検出するためサンドイッチELISA法を、ELSZ-2000を用いて粒子径100nm範囲のピークを観察した。また、transmission electron microscopeにてエクソソームを観察した。
RNAを 3D-Gene RNA extraction reagentを用いて抽出した。3D-Gene キットを用いて、網羅的にmiRNAの発現を解析した。
網羅的解析より、解析した全miRNA 2632個のうち、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者で発現が上昇したのは25個のmiRNA、減少したのは23個のmiRNAであった。今後、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者特有のmiRNA探索のため、糖尿病患者の血清miRNA関連論文を参考に、これらのmiRNAについて詳細な解析を行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
新型コロナウイルス蔓延時期と重なり、対象となる被験者の診察控え、ならびに試料採取とコロナ検査が混同する可能性から、試料採取が遅延したため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、糖尿病を併発した慢性歯周炎患者特有のmiRNA探索のため、再度サンプルを採取し、網羅的解析によって得られたmiRNAについて詳細な解析を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナウイルス感染の蔓延のため、試料採取時期が大幅に遅れたことが理由である。当初の計画通り、網羅的解析結果を基にｑRT-PCRにて特異的miRNAを探索するためにプライマー等試薬購入の予定である。
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