| 研究課題/領域番号 |
20K10253
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| 研究機関 | 昭和大学 |
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研究代表者 |
葭葉 清香 昭和大学, 歯学部, 兼任講師 (60555358)
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| 研究分担者 |
鎌谷 宇明 昭和大学, 歯学部, 准教授 (00315003)
椋代 義樹 昭和大学, 歯学部, 講師 (50325099)
栗原 祐史 昭和大学, 歯学部, 兼任講師 (90514969)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 口腔内細菌叢 / メタゲノム解析 / 大動脈弁狭窄症 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、感染性心内膜炎との関連が示唆されている大動脈弁狭窄症に着目し、対象患者から採取した口腔内プラークと摘出弁組織の細菌叢について解析を行い、病態との関連について検討を行っている。
5症例の口腔内プラークと15症例の大動脈弁組織から抽出したDNAについて、次世代シークエンサーを行いて塩基配列を解読した。得られたシークエンスデータからヒト由来の配列を除去した後、データベースに照合し統計分析ソフトを使用し解析を行った。メタゲノム解析から同定された細菌種についてRT-PCR法を用いて結果の検証を行った。解析結果と臨床情報について統計学的に解析した。
メタゲノム解析結果より、口腔内プラークからはPrevotella属、Streptococcus属、Actinomyces属が多く同定された。一方、大動脈弁組織からはClostridioides属、Lactobacillus属、Staphylococcus属が多く同定された。主座標分析結果から、大動脈弁組織は細菌叢により、大きく2群に分類された。2群間の口腔内状況について統計学的に検討したところ、残存歯数、歯周ポケット深さに差は認められなかったが、舌背の細菌数、プロービング時の出血陽性率に有意差を認めた。
メタゲノム解析を行うことで、従来の手法では検出が困難であった微量細菌種を検出することができた。大動脈弁組織は細菌叢により大きく2群に分かれる傾向があり、菌血症の発症リスクと関連する可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
臨床検体サンプルの収集が予定より時間を要したため、その後のDNA抽出やシークエンス解析にスムーズに移行することができなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
現在まで5症例の口腔内プラークと15症例の大動脈弁組織から抽出したDNAについて、次世代シークエンサーを行いて塩基配列を解読した。現在、これまで得られた結果を論文にまとめており、投稿予定となっている。
また、症例数を増やし、シークエンス解析結果から得られた候補細菌種についてRT-PCR法を用い検証の継続をおこなっていく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
臨床検体の収集に予想より時間がかかった。そのため、その後のDNA抽出やシークエンスに移スムーズに移行することができなかった。RT-PCRや各種解析を行うための試薬の費用、論文にまとめるための校正費等に使用する予定である。
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