| 研究課題/領域番号 |
20K11241
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
小阪 淳 国際医療福祉大学, 医学部, 教授 (40243216)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | リンパ浮腫 / 動物モデル / ポドプラニン |
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| 研究実績の概要 |
2次性リンパ浮腫に対して、患肢の運動療法が浮腫軽減・リンパ管網の再構築に効果があるかどうかを、「続発性リンパ浮腫の実験動物モデル」を用いて検証することが本研究の目的である。この動物モデルのリンパ浮腫発症、治癒過程において、リンパ管内皮細胞の量的変化、形態変化が起こることは既に確かめられている。初年度より継続して、副作用としてリンパ浮腫を引き起こすとされる、タキソイド系抗腫瘍剤（ドセタキセル）を成獣雌ラットに注入し、続発性リンパ浮腫が簡便に再現できるかどうかを検討した。3クールにわたる注入の後、動物を麻酔薬の大量投与により安楽死させ、灌流固定後、脱灰し、下肢の全周パラフィン標本を作成した。リンパ管内皮細胞マーカーである抗podoplanin抗体を用いて、リンパ管内皮細胞を下肢の全周標本上で免疫組織化学的に描出し、リンパ管形態を調査している。このリンパ管内皮細胞の同定法は、すでに確立済みである。リンパ管形態を、「環状」「線状」「点状」等に分けて計測し、それぞれを定量化することで、正常対照との比較を行っている。
今年度は、さらにmRNAレベルでもリンパ管内皮細胞の動態を追跡するため、in situハイブリダイゼーション法を用いて、podplaninの転写産物同定の準備を進めている。現在、rat皮膚と、rat胚のmRNAより、RT-PCRでpodoplaninをコードするcDNA断片の単離を試みている。mRNAは、タンパク質に先んじて発現するだけでなく、免疫組織染色よりバックグラウンドが低く、かつ感度が高く検出可能であるので、成果が期待できる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
昨年度来の遅れを取り戻すことが出来ず、やや遅れている状況に変わりはない。新型コロナウイルス感染症の蔓延により、試薬、物品の入手遅延、実際の研究の遂行に、少なからず支障が発生した。また、オンライン講義への対応、担当する実習日程の変更など、本務である教育業務にかける時間と労力が増加したこともあり、本課題遂行にかかるエフォート率の実質的な減少をきたした。
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| 今後の研究の推進方策 |
リンパ管内皮細胞マーカーである抗podoplanin抗体を用いて、リンパ管内皮細胞を標本上で免疫組織化学的に描出し、リンパ管形態を調査してゆく。この実験に加えて、in situハイブリダイゼーション法によるリンパ管内皮細胞の同定を試みる。試薬や物品の入手もほぼ完了したので、研究が遂行できる環境が整ってきており、年次計画に近い形で研究が実施できると考えている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
備品の機種選定が難航しており、支出が滞っているため。
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