| 研究課題/領域番号 |
20K11297
|
|---|
| 研究機関 | 大阪人間科学大学 |
|---|
研究代表者 |
奥村 裕 大阪人間科学大学, 保健医療学部, 准教授 (10727572)
|
|---|
| 研究分担者 |
高木 都 奈良県立医科大学, 医学部, 研究員 (00033358)
浅田 啓嗣 鈴鹿医療科学大学, 保健衛生学部, 教授 (10440851)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
| キーワード | 関節リウマチ / 滑膜細胞 / 機械的刺激 / CRAC阻害薬 |
|---|
| 研究実績の概要 |
滑膜細胞の力学的刺激（shear stress; SS）に対する細胞内カルシウムを介したシグナル伝達経路においてCRACの関与を明らかにすることを目的とし研究を実施した。
これまでに滑膜細胞へ力学的刺激（shear stress; SS）を加えると滑膜細胞内のCa2+濃度([Ca2+]i )の上昇が確認された。しかし、細胞外の培地にはCa2+が含まれていることから、滑膜細胞内のCa2+濃度([Ca2+]i )上昇には細胞外Ca2+が関与している可能性がある。
そこで、Ca2+フリーの条件下におけるSSに対する細胞内のCa2+濃度([Ca2+]i )の変化を検証した。細胞は、正常ヒト滑膜細胞（Normal FLS）および関節リウマチ由来ヒト滑膜細胞（RA FLS）を使用した。細胞内のCa2+濃度([Ca2+]i )の測定では、Fluo 3-AMを添加し、37℃で60分間インキュベートしたCa2+フリー条件の培地で培養した滑膜細胞にSSとしてガラス製マイクロピペットから窒素ガスを噴出させて2回機械的刺激を加えた。機械的刺激時の滑膜細胞内のCa2+濃度（[Ca2+]i）の変化を蛍光倒立顕微鏡に装着したデジタルイメージングシステムを用いてを測定した。
その結果、機械的刺激に対する1回目の応答は観察されたものの、2回目の応答は観察されなかった。このことから、1回目の応答ではERに保存されているCa2+が放出された可能性が示唆された。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
Ca2+フリーの条件下におけるSS（shear stress）に対する滑膜細胞内のCa2+濃度([Ca2+]i )の変化を検証した結果、機械的刺激に対する1回目の応答は観察されたものの、2回目の応答は観察されなかったため、1回目の応答ではERに保存されているCa2+が放出された可能性が示唆された。しかし、正常ヒト滑膜細胞（Normal FLS）および関節リウマチ由来ヒト滑膜細胞（RA FLS）における機械的刺激により活性化するとされるTRPファミリーのTRPV4チャネルの働きや、その分布について、カルシウムイメージングによる細胞内Ca2+濃度([Ca2+]i )の変化や免疫細胞化学的分析については検証ができていない。
|
| 今後の研究の推進方策 |
今後は、正常ヒト滑膜細胞（Normal FLS）および関節リウマチ由来ヒト滑膜細胞（RA FLS）における機械的刺激により活性化するとされるTRPファミリーのTRPV4チャネルの働きや、その分布について、カルシウムイメージングによる細胞内Ca2+濃度([Ca2+]i )の変化や免疫細胞化学的分析により検証する予定である。これらの検証により、SSにおける細胞内Ca2+濃度([Ca2+]i )上昇時のチャネルの選択性を検証する予定である。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
コロナウィルス感染症により研究の進行が遅れたため。
|
