| 研究課題/領域番号 |
20K11424
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
數野 彩子 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (00338344)
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| 研究分担者 |
上野 隆 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 客員教授 (10053373)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | マイオカイン / カルノシン / プロテオミクス / nanoLC-MS/MS / イミダゾールジペプチド / C2C12 / 骨格筋細胞分化 |
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| 研究実績の概要 |
近年、骨格筋からマイオカインと総称される生理活性因子が分泌されていることが明らかになり、がんや糖尿病など種々の疾患との関連が報告されている。一方、筋肉中に多く含まれるイミダゾールジペプチドは疲労軽減の効果などから注目されている。本研究の目的はC2C12細胞株を骨格筋の分化・再生モデルとして用い、カルノシンに代表されるイミダゾールジペプチドがC2C12のマイオカイン分泌や分化へどのような影響を及ぼすかを明らかにすることである。
C2C12マウス骨格筋細胞をカルノシン、またはその前駆体であるβ-アラニンを添加した分化誘導培地で培養し、定量プロテオミクス解析を行い発現タンパク質についてコントロールと比較した。nanoLC-MS/MSを用いたiTRAQ誘導体分析では1661、SWATH解析では1926のタンパク質を同定、定量し、そのうち1367が共通したタンパク質であった。より多くのタンパク質を定量できたSWATH解析結果をもとにコントロールに対して２倍以上の変動のあったタンパク質についてgene ontology解析を行った。カルノシン添加条件の場合、タンパク質輸送やRNA binding関連等の分類が上位になった。パスウェイ解析では“Ribosome biogenesis in eukaryotes”などが同定された。β-アラニンを添加した場合もおおむね同様の解析結果であったが、タンパク質輸送やRNA binding関連等に加え転写や代謝に関する分類も同定された。以上により、カルノシンやその前駆体であるβ-アラニンを添加した培養条件ではコントロールと比較し細胞の増殖に必要なタンパク質の発現が亢進していると推測された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究はC2C12細胞株を骨格筋の分化・再生モデルとして用い、イミダゾールジペプチドがC2C12のマイオカイン分泌や分化へどのような影響を及ぼすかを明らかにすることを目的としている。今年度はC2C12の分化誘導培地による培養、培養細胞のプロテオミクス分析およびgene ontology解析、パスウェイ解析等を行った。当初の実施計画では培養上清中に分泌されるマイオカインの測定を行う予定であったが、試薬類の輸入の遅れ等により実施が困難であったため次年度に延期し、次年度の実施計画であったプロテオミクス解析を先行して行った。
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| 今後の研究の推進方策 |
本研究の目的であるC2C12細胞株を骨格筋の分化・再生モデルとしてイミダゾールジペプチドがC2C12のマイオカイン分泌や分化へどのような影響を及ぼすかを明らかにするため、マルチプレックス蛍光ビーズ同時測定法により培養上清中に分泌されるマイオカインを測定する。さらにnanoLC MS/MS分析による培養上清のsecretome解析を行い、今年度解析を行った分化誘導による細胞の遺伝子発現変化との関連を明らかにする。一方、C2C12細胞については定量プロテオーム解析を再度実施し再現性を確認する。統計解析を行うことにより重要な因子を絞り込む。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度予定したマルチプレックス蛍光ビーズ同時測定実験であるが、試薬類の輸入の遅延により実施を延期した。代わりに次年度に実施する計画であったプロテオミクス解析等を先行して対応した。これにより今年度購入予定であったマルチプレックス蛍光ビーズ同時測定法に必要な試薬類の購入を来年度に変更したため当初の計画と差が生じた。
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