体組成計測とマイクロRNA測定による非アルコール性脂肪性肝疾患の重症化予測法開発

2021 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 20K11531
• 研究機関: 香川大学
• 研究代表者: 米山 弘人 香川大学, 医学部附属病院, 助教 (80294750)
• 研究分担者: 岩間 久和 香川大学, 医学部, 准教授 (20398035) ; 正木 勉 香川大学, 医学部, 教授 (30335848)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2023-03-31
• キーワード: 非アルコール性脂肪肝炎 / 体組成計測 / マイクロRNA

研究実績の概要

食生活習慣の欧米化で急増している非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）の中から肝関連死亡率が非常に高い非アルコール性脂肪肝炎（NASH）を発症する高危険群を正確に選別する簡便な診断法の開発を目標とし、健康医学や患者指導の場で広く活用されている体組成計測と新規バイオマーカーの血清マイクロＲＮＡ(miRNA)測定を組み合わせた斬新なＮＡＳＨ発症予測法の確立に着手しました。
当施設で病理診断されたNAFLD/NASH患者50名（NASH25名、非NASH 25名）に栄養指導と共に生体電気インピーダンス法で体組成計測を行い、体脂肪と筋肉量から体組成型を分類すると同時に患者血清を採取保存しその血清マイクロRNA（miRNA）を網羅的に解析しました。miRNAの解析は約2600分子種のmiRNAを搭載したオリゴチップに、血清から精製した資料をハイブリダイゼーションした後にmiRNA解析専用スキャナーで取り込み、各miRNA分子種の発現強度を測定した。体組成計測では全症例が5つの型に分類され、各体組成型の症例の病理組織型からＮＡＳＨ症例と非ＮＡＳＨ症例を区別し、ＮＡＳＨ－非ＮＡＳＨ間で各miRNAの発現強度を比較解析したところ、ＮＡＳＨ症例で特異的に発現強度が変化しているmiRNA分子種複数同定できました。
更にそれらのmiRNA分子種が体組成型においてどのように異なるかについて解析を試みていましたが、研究初年度（令和2年）の解析症例の約半数の保存血清において、検体量不足からmiRNA解析に必要な精製試料を確保できず、エントリーした50名の内約半数において未測定となってしまいました。そこで急遽症例集積の追加を行い統計的解析を行える検体数が揃う様に研究を継続してきました。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

保存血清の検体量不足によりmiRNA網羅的解析が行えなかった症例数を補うため、症例の追加エントリーを行い、症例集積を行ってきました。非NASH群の症例は概ね解析に必要な症例数を確保できましたが、NASH群の症例については未だ解析に必要な症例数を確保できていません。新型コロナウイルスの蔓延による影響で当院への新規患者紹介数が減少し、また紹介を受けた患者様においても新規研究への参加同意取得に至る症例が以前より減少しました。特にNASH症例群では肝疾患以外にも合併疾患が多く、他科の診療時間も合わせると長時間の院内滞在時間となるため研究同意取得における落ち着いた面接環境を取ることが難しい状況が続きました。
当初の研究計画では体組成計測で分類した体組成型の各グループにおいてNASH―非NASH間で発現強度が有意に変化しているmiRNA分子種を同定し、体組成計測と血清miRNA解析を組み合わせたNASH予測アルゴリズム作成し、更にそのアルゴリズムを応用してNASHによる肝発がんの予測についても解析を行っている段階でしたが、上記の経過にてまだアルゴリズム完成が達成できていません。

今後の研究の推進方策

今年度は追加でエントリーを行っている症例（特にNASH群）を解析に必要な症例数確保し、全ての症例においてmiRNA解析を完了させ、体組成判定と特定のmiRNA発現パターンからＮＡＦＬＤの重症度（NASH発症）予測ができるアルゴリズムを完成させる予定です。
更に長期フォロー期間中にNASH発症前と発症後のそれぞれにおいて体組成計測データが得られていた症例において、作成したアルゴリズムを適応し、体組成計測と血清miRNA測定値からの予想が実際の病理組織結果と一致しているかを検証し、アルゴリズムの診断精度を検証します。
またNASH群の中でも特に肝発がんに至った症例において特異的に発現している血清miRNAを同定し、体組成計測との組み合わせにより、NAFLD症例の中から肝発がんに至るリスクの高い症例を選別するアルゴリズム作成を目指します。

次年度使用額が生じた理由

当該年度の解析症例数が予定より少なく、検体からのマイクロRNA抽出作業、およびマイクロＲＮＡ解析実験に必要な物品購入が予定の約半分程度次年度へ持ち越しとなりました。また研究進行の遅れにより当初予定していた専門学会での研究成果報告や国際誌への投稿を目指した解析に必要な機材（専用ソフト等）も次年度に持ち越しとなりました。以上の経過により次年度使用額が発生したものです。
今年度は5月末頃までに上記の追加症例の検体を揃える予定であり、その後速やかに必要物品を購入し前年度から持ち越しのマイクロＲＮＡ解析を完了し研究計画の遅れを取り戻し、専用ソフトや解析用コンピューターを使用して研究を完成させ、研究成果を学会等に演題登録、参加発表し、国際誌にも投稿する予定です。

研究成果

• [雑誌論文] Identification of microRNA associated with the elimination of hepatitis C virus genotype 1b by direct‐acting antiviral therapies. (2021)
  • 著者名/発表者名: Yoneyama Hirohito、Morishita Asahiro、Iwama Hisakazu、Fujita Koji、Masaki Takahiro、Tani Joji、Tadokoro Tomoko、Nomura Takako、Sakamoto Teppei、Oura Kyoko、Takuma Kei、Nakahara Mai、 Mimura Shima、Deguchi Akihiro、Tsutsui Kunihiko、Himoto Takashi、Shimotohno Kunitada、Wakita Takaji、Kobara Hideki、Masaki Tsutomu
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology and Hepatology 巻: 36 ページ: 1126-1135
  • DOI: 10.1111/jgh.15224
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Association between microRNA-527 and glypican-3 in hepatocellular carcinoma. (2021)
  • 著者名/発表者名: Nomura K, Kitanaka A, Iwama H, Tani J, Nomura T, Nakahara M, Ohura K, Tadokoro T, Fujita K, Mimura S, Yoneyama H, Kobara H, Morishita A, Okano K, Suzuki Y, Tsutsi K, Himoto T, Masaki T.
  • 雑誌名: Oncology Letter 巻: 21 ページ: 229
  • DOI: 10.3892/ol.2021.12490
  • 査読あり / 国際共著