研究課題/領域番号 |
20K15596
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研究機関 | 東京海洋大学 |
研究代表者 |
松本 萌 東京海洋大学, 学術研究院, JSPS特別研究員 (70866441)
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研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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キーワード | Mycobacterium / ニジマス / 休眠期 / VBNC / 魚類抗酸菌症 |
研究実績の概要 |
養殖魚に発生する抗酸菌症は、日本の養殖業に多大な経済的被害をもたらす疾病の一つである。原因細菌であるMycobacterium spp.は、感染後すぐに症状を示す「活動期」と、宿主細胞にとどまり再燃の機会を待つ「休眠期」の2つの状態を持つ。本年度の研究では、ニジマス抗酸菌症の原因細菌であるMycobacteroides salmoniphilumを用いて、培養液の温度変化がM. salmoniphilumの状態変化に及ぼす影響を明らかにした。 M. salmoniphilumを液体培地に植菌後、培地を5℃から25℃まで5℃間隔で割り振り、吸光度を測定した。M. salmoniphilumは10-25℃で培養した培養液中では急速な増殖がみられたが、5℃培養液中では増殖活動が停止した。各温度で培養した菌を電子顕微鏡下で観察すると、25℃で培養した菌は長桿であったが、5℃で培養した菌の形状は短桿または球であることが明らかになった。また、5℃で培養した菌の細胞壁は薄層化していた。さらに、菌体最外周部の脂質層であるミコール酸についてGC-MS分析で解析したところ、5℃で培養した菌のミコール酸層は失われていた。これらの特徴は休眠期のMycobacterium spp.の特徴と一致しており、5℃で培養したM. salmoniphilumは休眠することが示された。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初の研究計画では、in vitro条件下(培養液中)でM. salmoniphilum休眠時の表現型を明らかにしたのち、in vivo条件下(ニジマス中)における、菌の状態と周囲の組織変化を明らかにする予定であった。しかしながら新型コロナウイルスの蔓延により、実験所でのニジマスを用いた感染試験を行うことができなかった。したがって、感染試験については本年度改めて実施する必要がある。
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今後の研究の推進方策 |
昨年度実施予定であったニジマスの感染試験を行い、in vivoおよびin vitro条件下における菌の状態変化をモニタリングする。これは感染ニジマスの組織切片上における菌の形態、染色性または組織上の局在から明らかにする。同時にin vitro培養条件下での活動菌、休眠菌の脂質組成をUPLC-Q-TOFを用いたリピドーム解析に供し、2つの状態間で差がある脂質について明らかにする。これらを明らかにしたのち、差がある脂質に対する免疫応答(サイトカイン産生および肉芽腫形成)について調べる。
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