| 研究課題/領域番号 |
20K16205
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| 研究機関 | 愛知医科大学 |
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研究代表者 |
伊藤 秀明 愛知医科大学, 医学部, 講師 (90711276)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 乳癌 / タイトジャンクション / ソニックヘッジホッグ / 細胞極性 / 浸潤 |
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| 研究実績の概要 |
乳癌をはじめとする癌細胞では、細胞接着の減弱及び細胞極性の喪失により浸潤が引き起こされると考えられている。特に、非浸潤性乳管癌では、細胞接着の減弱化やそれに伴う細胞極性の喪失が浸潤性乳管癌に至る過程で生じていると考えられている。しかし、その分子メカニズムはこれまでほとんど明らかにされていない。我々は乳癌で発現が亢進しているヘッジホッグ関連因子・中心小体複製関連因子であるSTIL（SCL/TAL1 interrupting locus）がTRAF4を介してタイトジャンクションの減弱を引き起こしていると考えられる知見を得た。本研究では、STILによるタイトジャンクション減弱機構を分子細胞生物学的手法と病理組織学的解析の両面から明らかにし、病理組織診断におけるこれまでにない非浸潤性乳管癌の浸潤リスク評価法の確立を目指している。これまでに、乳癌を含む培養細胞を用いてProximity ligation assay(PLA法）及び免疫沈降法を施行することによりSTIL-TRAF4の結合をin situおよびin vitroで確認している。これらの成果は、細胞中でSTIL-TRAF4が複合体を形成していること示唆する結果である。
本年度は、STILとTRAF4およびタイトジャンクションのマーカーであるZO1の細胞結合部での解析を継続するとともに、これまでに我々がSTILと複合体を形成することを見出しているCortactinとタイトジャンクションの関係について解析を追加した。病理組織の解析については、微小浸潤癌を含む浸潤性乳管癌を中心に染色条件を決定し、解析を開始している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、STILとTRAF4およびタイトジャンクションのマーカーであるZO1の細胞結合部での解析を、複数の乳癌培養細胞を用いて施行した。また、これまでに我々がSTILと複合体を形成することを見出しているCortactinが、タイトジャンクションに影響している可能性について評価するため、STIL-Cortactinとタイトジャンクションの関係について解析を追加した。その結果、乳癌培養細胞ではSTILノックダウンにより細胞接合部のZO1陽性率が増加するとともに、Cortactinの局在もより細胞接合部側に変化することを見出した。
また、ヒトSTILを用いたレスキュー実験・ライブイメージングを施行するため、STILのsiRNA認識部位にサイレント変異を導入した変異体を作製した。
病理組織の解析については、微小浸潤癌を含む浸潤性乳管癌を中心に染色条件を決定し、解析を開始している。
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| 今後の研究の推進方策 |
STILとTRAF4の関連についての解析を継続するとともに、タイトジャンクションにおいてSTILとCortactinの結合およびその役割について追加して解析を行う予定としている。本年度作製したヒトSTILサイレント変異体と合わせ蛍光付加組み換え体を作製し、ライブイメージングを施行したいと考えている。
また、病理組織学的解析では、非浸潤性乳管癌や微小浸潤癌を含む浸潤性乳管癌の症例について予備検討完了後、免疫染色及びPLA法での解析を予定している。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度は、TRAF4、タイトジャンクション関連因子及びCortactinの蛍光付加組み換え体作製が完了しておらず、生細胞中でのイメージング実験の準備が完了しなかった。そのため繰越金が生じている。次年度にはSTIL、TRAF4、Cortactinの蛍光付加組み換え体を完成させ、実際に乳癌培養生細胞に導入し、その挙動を観察・解析する予定であり、繰越金は次年度の経費に加えて使用する予定である。
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