| 研究課題/領域番号 |
20K16270
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
直 亨則 北海道大学, 人獣共通感染症リサーチセンター, 特任助教 (00781741)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | ヒトメタニューモウイルス |
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| 研究実績の概要 |
インターフェロン誘導因子（ISG）の機能としては抗ウイルス作用や抗癌作用が良く知られている。ウイルス学分野におけるこれまでの研究では、ISGの抗ウイルス作用に注目した研究が大半であった。一方ISGには５００種類を超える遺伝子が知られており、その詳細機能やメカニズムが不明なものも多く、また直接的な抗ウイルス作用以外の機能を持つ遺伝子も報告されている。本研究では最新の遺伝子編集技術（CRISPR/CAS9システム）を用いて作成したゲノムワイドノックアウト細胞ライブラリー、及びISG発現ベクターライブラリーを用いて、ヒトメタニューモウイルス（HMPV）の感染・増殖を増強するISGを同定することを目的としている。初年度である今年度はHeLa細胞より作出したゲノムワイドノックアウト細胞ライブラリーを用いて実験を行った。HMPVは細胞変性効果（CPE）が軽度であり、感染細胞と非感染細胞の分離が困難であったが、ウイルス感染ライブラリー細胞を長期間培養することにより、HMPV非感染細胞すなわち、HMPVへの感受性が低下した細胞を効率的に回収することに成功した。回収したHMPV非感染細胞を次世代シークエンサーを用いて解析し、HMPVの細胞吸着等に関する宿主因子等とともに、複数のISGが同定された。これらの候補ISGについて、現在個別にノックアウト細胞の樹立を進めており、一部のノックアウト細胞では他のウイルスの感染性は変化しないか増強するにもかかわらず、HMPVの感染性が低下することを確認している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、本研究計画に必要不可欠であるHMPVの感染・増殖を増強する候補ISGを複数同定することが出来た。
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| 今後の研究の推進方策 |
本年度に同定したHMPVの感染・増殖を増強する候補ISGについて個別にノックアウト細胞を作製し、候補ISGがHMPVの感染・増殖を増幅するメカニズムを解明する。また、HMPVの亜型や株の差異と候補ISGの感染・増殖への影響を比較検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度は効率的に研究を進めたため、次年度使用額が生じた。特に多額の費用が必要であった次世代シークエンサーの解析について、他の研究計画と合わせての解析が行えたため、大幅な研究費の節約が可能であった。次年度は当初の予定通り研究を進めるとともに、他の実験系を用いてより複数の候補宿主因子を同定する予定である。
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