| 研究課題/領域番号 |
20K16312
|
|---|
| 研究機関 | 東海大学 |
|---|
研究代表者 |
山崎 寛之 東海大学, 医学部, 奨励研究員 (90837816)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
| キーワード | 滑膜肉腫 / 融合遺伝子 / DNA修復 |
|---|
| 研究実績の概要 |
滑膜肉腫は染色体転座t(X; 18) (p11.2; q11.2)によって生じる悪性腫瘍である。染色体転座によって生じるSS18-SSXを線維芽細胞に発現させると、腫瘍化することから、この染色体転座が滑膜肉腫の発症に重要であることが示唆されている。本研究は滑膜肉腫におけるDNA修復異常およびPARP阻害剤高感受性の原因を解明することを目的としている。DNA二本鎖切断は主に相同組換え修復および非相同末端結合の２種類の経路で修復される。非相同末端結合で働く53BP1とRIF1をそれぞれ滑膜肉腫細胞で欠損させると、RIF1を欠損させた細胞のみ浮いてきた。非相同末端結合では53BP1が上流で働くため、非相同末端結合とは異なるRIF1の機能が滑膜肉腫の生存に必要である可能性が示唆された。RIF1は非相同末端結合の他にDNA複製を負に制御する機能があるため、RIF1によるDNA複製の抑制が滑膜肉腫の生存に必要であることが考えられた。そこで、今年度はDNA複製の状態を可視化するDNA fiber analysisおよびPARP阻害剤の感受性を決める因子であるsingle strand DNA (ssDNA) gapを測定するための系を立ち上げた。また、DNA二本鎖切断修復経路選択に関わる53BP1とBRCA1のDNA損傷部位へのリクルートに必要なRNF168が滑膜肉腫において高発現しており、HCT116細胞にSS18-SSXを発現させることで、RNF168のタンパク質量が増加することを見出した。次年度はDNA fiber analysisおよびssDNA gapを測定する系を用いて、滑膜肉腫におけるDNA修復異常およびPARP阻害剤高感受性の原因の解明を進めていく予定である。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
今年度はDNA複製に着目し、DNA複製の可視化およびPARP阻害剤の感受性を決めるssDNA gapを測定する系の導入を行った。さらに、53BP1とBRCA1のDNA損傷部位へのリクルートに必要なRNF168が滑膜肉腫において過剰発現していることを見出したことは重要な知見である。これによって、次年度は効率的に実験を進めることが期待できる。
|
| 今後の研究の推進方策 |
RNF168が滑膜肉腫において高発現しており、HCT116細胞にSS18-SSXを発現させることで、RNF168のタンパク質量が増加することを見出している。これらの知見から、滑膜肉腫におけるRNF168の過剰発現がDNA修復異常を引き起こす原因になっているかを調べていく予定である。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度は、系の立ち上げなどを行い、解析については遅れており、使用額が当初の予定より少なくなったため、次年度使用額が生じた。次年度は、今年度立ち上げた系を用いて解析を行なっていくため、物品費が増える予定である。
|
