| 研究課題/領域番号 |
20K16491
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| 研究機関 | 滋賀医科大学 |
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研究代表者 |
渡邊 直希 滋賀医科大学, 神経難病研究センター, 助教 (60769339)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | アルツハイマー病 / Amyloid-β / ILEI / 遺伝子発現制御 / 老年期認知症 |
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| 研究実績の概要 |
[a] ILEI転写制御機構と老化に伴う発現低下機構の解析
特定したILEI発現制御領域とILEI制御因子候補との結合をゲルシフトアッセイおよびChIP-qPCRにより解析したところ、DNA領域と制御因子の結合が確認できた。
[b] 脳ILEI発現低下がAD発症のリスク要因であることの検証
App(NL-F);ILEI-icKOマウスの解析に関しては、Tam投与により前脳領域の神経細胞に特異的なCaMKIIプロモーター下でCre発現を誘導できるILEI遺伝子を欠損させたILEI-icKOマウスを作製し、さらにSwedish + Iberian変異型ヒト化APPノックイン(App(NL-F))マウスと交配した。脳のILEI発現レベルは出生直後に最も高く、その後は徐々に減少することから、発生による影響を避けるため、成熟後にTam投与を行った。3か月齢および6か月齢のApp(NL-F/NL-F);CaMKII-iCreERT2(+/-);ILEI(flx/flx)マウスおよびコントロールマウスにTam投与し、14か月齢にてAβ免疫組織染色およびELISAを実施したところ、App(NL-F/NL-F);ILEI-cKOでAβ沈着の増加が認められた。3か月齢にTam投与を行ったApp(NL-F);ILEI-icKOマウスの方が6か月齢のものよりもAβ沈着の増加は大きかった。9か月齢にTam投与を行った場合には有意差は見られなかった。さらに、充分成熟した時期の6か月齢において、Y字迷路により短期の作業記憶を測定したところ、コントロールと比較し、10か月齢からalternationの有意な減少が見られた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
[a] ILEI転写制御機構と老化に伴う発現低下機構の解析
特定したILEI発現制御領域とILEI制御因子候補との結合をゲルシフトアッセイおよびChIP-qPCRにより確認できた。
[b] 脳ILEI発現低下がAD発症のリスク要因であることの検証
App(NL-F);ILEI-icKOマウスの解析のため、充分な数のマウス個体を準備でき、Tam投与を行った。14か月齢にてAβ免疫組織染色およびELISAの実施を一通り終えた。Tam投与後の7か月齢から14か月齢までY字迷路の測定を一通り終えた。
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| 今後の研究の推進方策 |
[a] ILEI転写制御機構と老化に伴う発現低下機構の解析
・加齢やADにおける転写活性低下の解析のため、剖検脳から核タンパク質を抽出し、各転写因子候補の発現量変化を調べるなど、転写因子からの要因を検討する。
[b] 脳ILEI発現低下がAD発症のリスク要因であることの検証
・App(NL-F);ILEI-icKOマウスに対する免疫組織学的な解析を行う。また、C57BL/6JバックグラウンドのILEI-icKOマウスに対する解析も実施する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナウイルス感染症の影響で物品の納品が遅れているため、次年度使用額が生じた。次年度の早い時期に使用する見込みである。
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