Droplet Digital PCR法を用いた中枢神経感染症の高感度検出法開発

2021 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 20K16534
• 研究機関: 藤田医科大学
• 研究代表者: 東本 祐紀 藤田医科大学, 医療科学部, 講師 (20569701)
• 研究期間 (年度): 2020-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: HSV-1 / HSV-2 / VZV / Droplet Digital PCR

研究実績の概要

中枢神経感染症の鑑別診断においては、現在の標準法であるreal-time PCR（qPCR）法を用いても、いまだ約半数が原因不明とされ、より高感度な検査法が望まれている。近年、Droplet Digital PCR（ddPCR）法を用いた高感度な病原微生物検出法の有用性が報告されている。本研究ではddPCR法を用いた3種のαヘルペスウイルス検出法を確立するため、既存qPCR法との比較検討を行った。
HSV-1とHSV-2は実験室株（KOS株、186株）、VZVはワクチン株（乾燥弱毒生水痘ワクチン「ビケン」）のウイルス液からQIAamp DNA Blood Mini Kit（QIAGEN）を用いてDNAを抽出した。qPCR法、ddPCR法のプライマー、プローブセットは同一のセットを使用した。qPCR法はStepOneTM（Applied Biosystems）Fast modeにて、95℃ 20秒、95℃ 1秒、60℃ 20秒を50 cyclesでPCRを行った。ddPCR法はQX200 AutoDG（Bio-Rad）にてドロップレットを作成、C1000 Touch Thermal Cycler（Bio-Rad）を用い96℃ 10分反応後、94℃ 30秒、56℃ 60秒、98℃ 10分を40 cyclesでPCRを行った。その後QX200 Droplet Reader（Bio-Rad）を使用してドロップレットの蛍光測定を行った。
qPCR法とddPCR法を比較検討した結果、HSV-1とVZVは、qPCR法がddPCR法より感度が良く、HSV-2では、ddPCR法とqPCR法は同程度の感度であった。ddPCR法では現状のqPCR法を上回る結果を得る事は出来なかった。感度向上のためには、ddPCR法のサンプル添加量の増量、プライマー・プローブセットの再設計などの検討余地がある。

研究成果

• [雑誌論文] Dynamics of salivary human herpesvirus‐6 and ‐7 shedding in pregnant women (2022)
  • 著者名/発表者名: Suzuki Noriko、Ihira Masaru、Enya Yasuko、Yumi Takahashi、Izuru Chisato、Rie Igarashi、Higashimoto Yuki、Hiroki Miura、Asaki Takanashi、Kaoru Fujimoto、Kawamura Yoshiki、Yoshikawa Tetsushi
  • 雑誌名: Journal of Medical Virology 巻: 2022 ページ: 1-9
  • DOI: 10.1002/jmv.27692
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rotavirus genotypes and clinical outcome of natural infection based on vaccination status in the post-vaccine era (2022)
  • 著者名/発表者名: Kozawa Kei、Higashimoto Yuki、Kawamura Yoshiki、Miura Hiroki、Negishi Takumi、Hattori Fumihiko、Ihira Masaru、Komoto Satoshi、Taniguchi Koki、Yoshikawa Tetsushi
  • 雑誌名: Human Vaccines & Immunotherapeutics 巻: 18 ページ: 1-8
  • DOI: 10.1080/21645515.2022.2037983
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Evaluation of varicella vaccine effectiveness during outbreaks in schools or nurseries by cross-sectional study (2021)
  • 著者名/発表者名: Kawamura Yoshiki、Hattori Fumihiko、Higashimoto Yuki、Kozawa Kei、Yoshikawa Tetsushi
  • 雑誌名: Vaccine 巻: 39 ページ: 2901～2905
  • DOI: 10.1016/j.vaccine.2021.04.009
  • 査読あり
• [雑誌論文] Diagnostic accuracy of LAMP versus PCR over the course of SARS-CoV-2 infection (2021)
  • 著者名/発表者名: Inaba Masato、Higashimoto Yuki、Toyama Yoko、Horiguchi Tomoya、Hibino Masaya、Iwata Mitsunaga、Imaizumi Kazuyoshi、Doi Yohei
  • 雑誌名: International Journal of Infectious Diseases 巻: 107 ページ: 195～200
  • DOI: 10.1016/j.ijid.2021.04.018
  • 査読あり
• [雑誌論文] Andrographolide, isolated from Andrographis paniculata, induces apoptosis in monocytic leukemia and multiple myeloma cells via augmentation of reactive oxygen species production (2021)
  • 著者名/発表者名: Doi Hiroki、Matsui Taei、Dijkstra Johannes M.、Ogasawara Atsushi、Higashimoto Yuki、Imamura Seiji、Ohye Tamae、Takematsu Hiromu、Katsuda Itsuro、Akiyama Hidehiko
  • 雑誌名: F1000Research 巻: 10 ページ: 542～542
  • DOI: 10.12688/f1000research.53595.1
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Effect of Lactococcus lactis Strain Plasma on HHV-6 and HHV-7 Shedding in Saliva: A Prospective Observational Study (2021)
  • 著者名/発表者名: Miura Hiroki、Ihira Masaru、Kozawa Kei、Kawamura Yoshiki、Higashimoto Yuki、Hattori Fumihiko、Yoshikawa Tetsushi
  • 雑誌名: Microorganisms 巻: 9 ページ: 1683～1683
  • DOI: 10.3390/microorganisms9081683
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] LAMP 法とデルマクイックVZV による水痘迅速診断法の有用性解析 (2021)
  • 著者名/発表者名: 東本 祐紀
  • 学会等名: 日本ワクチン学会
• [学会発表] ロボットを活用したCOVID-19ロボット自動PCR検査システムの評価 (2021)
  • 著者名/発表者名: 伊藤 弘康, 東本 祐紀, 水谷 謙明, 村山 元秀, 北原 公明, 藤田 孝, 齋藤 邦明
  • 学会等名: 日本医療検査科学会
• [学会発表] 2018/19シーズンに当院で経験したロタウイルス胃腸炎入院例の検討 (2021)
  • 著者名/発表者名: 服部 文彦, 大林 みどり, 浅井 ゆみこ, 須藤 湧太, 畑川 奈都樹, 平井 雅之, 三原 由佳, 川口 博史, 山田 緑, 河村 吉紀, 塩谷 泰子, 井平 勝, 東本 祐紀, 河本 聡志, 谷口 孝喜, 吉川 哲史
  • 学会等名: 日本小児感染症学会総会
• [学会発表] Rotarix 接種後の宿主免疫応答と便中ウイルス増殖の関連 (2021)
  • 著者名/発表者名: 塩谷 泰子、井平 勝、服部 文彦、東本 祐紀、平松 裕之、鈴木 竜太、 河村 吉紀、小澤 慶、河本 聡志、谷口 孝喜、吉川 哲史
  • 学会等名: 日本ワクチン学会