研究課題
先天性血栓性素因として、アンチトロンビン、プロテインC(PC)、プロテインS(PS)の欠損症がある。先天性血栓性素因のスクリーニング検査として、これらの抗原量および活性の測定が重要である。活性化PC(APC)は、PSを補酵素として、活性化第Ｖ因子(FVa)および活性化第Ⅷ因子を不活化し、凝固反応を阻止する。現在行われているPSおよびPC活性測定法は、凝固時間法もしくはトロンビンやAPCで分解される合成基質を用いた間接的な測定法であり、PSおよびPCの働きを直接定量化していない。そこで、本研究ではPSおよびPCによるFVaの不活化を直接定量し、PSおよびPC活性を算出することを目的としている。今年度は、FV改変体を発現する安定発現細胞株を樹立し、コバルトレジンを用いてFV改変体を大量に精製した。この精製FV改変体に、APC、PS、リン脂質を37℃で反応させ、ウェスタンブロット法およびELISAにてPSによるFV改変体の切断を確認した。その結果、PS濃度依存的にFV改変体の切断が確認できた。
2: おおむね順調に進展している
リコンビナントFV改変体を発現および精製し、精製タンパク質を用いたPS活性測定系を試すことができた。
正常血漿とPS欠乏血漿(いずれも市販品)の混合比を調整し、PS活性0-100％までの模擬血漿検体を作製し、精製したリコンビナントFV改変体を用いて活性測定をおこなう。さらに、PC活性測定系に関しても、精製タンパク質を用いた検討を開始したいと考えている。
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すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (3件) (うち国際学会 2件)
Research and Practice in Thrombosis and Haemostasis
巻: 5 ページ: 179～186
10.1002/rth2.12456
