| 研究課題/領域番号 |
20K16607
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
山口 剛史 国際医療福祉大学, 保健医療学部, 助教 (50726510)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 概日リズム / 脈絡叢 / 視交叉上核 / 松果体 / 脳脊髄液 |
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| 研究実績の概要 |
突発性正常圧水頭症でみられる脳脊髄液の過剰な貯留が認知症をきたす原因の一つとして知られている。脳脊髄液産生の場である脈絡叢の上皮細胞では時計遺伝子per2 mRNAが概日リズム性の発現をする。一方、脳内では脈絡叢、松果体、視交叉上核が示す概日リズムは24時間周期であるのに対して、単独培養下では各組織は24時間とは異なる周期を発振する。以上のことから、「脈絡叢からの脳脊髄液の産出は概日リズムにより制御されている」、「脳内では脈絡叢を含む自律的で異なる周期を発振する組織が互いに作用を及ぼしながら安定した概日リズムを形成している」という仮説を立て、検証を行った。
①脈絡叢では水チャネルaquaporin1を介して脳脊髄液を産生することを想定し、aquaporin1発現の概日リズムを期待したが、qPCR、免疫組織化学では組織分布、発現強度には日内変化は見られなかった。
②互いに作用を及ぼしながら安定したリズムを形成する脳内の４つの組織として視交叉上核、側脳室脈絡叢、第4脳室脈絡叢、松果体に着目した。組織間の相互作用を検討する前段階として、各組織ごとの培養条件（培養開始時間や培養液のpHなど）とその影響に対する検証を行い、今後の共培養実験における基準となる情報を得た。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
①脈絡叢における脳脊髄液産生に概日リズムをもたらす因子の第1候補としたaquaporin1は日内変化を認められなかったが、対象となる材料（組織や抽出したRNA）は確保できているので、他の関連因子に関して順次検証を進めている。
②本研究で用いるPer2::dLuc トランスジェニックラットから摘出した４組織片のルシフェラーゼ発光測定に適した培養条件は確定している。
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| 今後の研究の推進方策 |
①脈絡叢における脳脊髄液産生に概日リズムをもたらす因子としてカチオンチャネルTRPV４やクロライドチャネルANO1に着目し、脈絡叢上皮細胞における発現変化について検証を進めている。特にTRPV4は膀胱の内側上皮細胞に存在し、概日リズム性の発現を示すことが報告されていることから期待している。
②脈絡叢単独の培養での概日リズムの周期は約22.5時間を示した。培養下で側脳室脈絡叢や第4脳室脈絡叢と他の組織を物理的に接触させたときに固有の周期に変動がみられるかについての検証を行っている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
初年度の購入分として申請していた機器は、培養下での組織のルシフェラーゼ発光の測定を行う際に、一度に取り扱える数を増やすことを目的に追加での購入を計画していたが、測定スケジュールの変更に伴い購入を中止した。このスケジュール変更による追加の実験用として試薬代の使用を予定している。
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