| 研究課題/領域番号 |
20K16936
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
阿部 清美 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 共同研究員 (30594973)
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| 研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | Pax8変異 / 遺伝子改変マウス / 先天性甲状腺機能低下症 / 甲状腺形成異常 / Nkx2.1変異 / 腺腫様甲状腺腫 |
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| 研究実績の概要 |
器官特異的転写因子であるPaired box 8 (PAX8)は、甲状腺の発生、分化、組織形成に必須であり、その機能低下変異により、甲状腺形成異常を伴う先天性甲状腺機能低下症を来す。新規PAX8（G56S）変異を保有する大家系において、既報とは異なる特異な臨床像（甲状腺機能の年代別変化、胎児様甲状腺組織、成人中年期以降の腺腫性甲状腺腫出現）を観察した。
ゲノム編集技術を用いてPAX8（G56S）変異マウスモデルを作成し、変異の病因性（甲状腺機能低下症や甲状腺形成障害を惹起するか）を明らかにするとともに、胎児様甲状腺および腺腫性甲状腺出現のメカニズムを解明する。
本研究は、以下の通りに計画・実施中である。①ゲノム編集技術を用いたPax8（G56S）変異マウスの作成。②甲状腺機能評価。③体格を含む外的表現型および甲状腺組織の評価。④甲状腺組織のたんぱく質や遺伝子発現を観察し、濾胞形成不全や腺腫発生の機序の探索。⑤甲状腺形態や濾胞形成過程の継時的観察、胎児様甲状腺や腺腫様甲状腺腫の出現を観察。⑥Pax8（G56S）変異マウス単独で表現型が得られなかった場合、PAX8と連携して働くNKX2.1転写因子のノックアウト（KO）マウスとの交配で作製したPax8（G56S）/Nkx2.1（KO）マウスについて、上記②～⑤を検討。4年計画の2年目にあたる2021年度はPax8（G56S）変異マウス、Pax8 KOマウス、Nkx2.1 KOマウスの作成を完了。それぞれ変異型別に、②甲状腺機能評価および③体格評価を行った。甲状腺機能評価に用いるTSH測定アッセイが安定せず、サイロキシンT4測定によって評価を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
2020年のCOVID-19感染によるマウス作製中断の影響を受けて研究の遅れが生じ、さらに2021年度は、当研究室所属の動物飼育舎改築が行われ、飼育マウス数の制限により、表現型解析を行えるマウス数が限定されたため、昨年度の遅れを挽回するには至らなかった。
また、2021年度は研究計画①～⑥のうち、①は完了したものの、②の甲状腺機能評価アッセイ系が安定しないことも、実験の進捗が遅れた理由の一つである。TSH測定アッセイからT4測定系へ変更し、現在、状況は改善している。
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| 今後の研究の推進方策 |
2022年度は、飼育マウス数の制限が解除されるため、表現型解析に用いるマウス数を増加し、研究進度を早めたい。②の甲状腺機能評価の系を安定させ、各変異の甲状腺機能評価を行ったうえで、③，④の表現型解析を急ぐ。また、継続的観察の⑤は、次年度までかかる計画のため、2022年度より開始する。。Pax8（G56S）変異マウス単独で表現型が得られなかった場合のため、⑥のPax8（G56S）/Nkx2.1（KO）マウスの作成および表現型解析も同時に始める。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当該年度は、当方利用動物飼育施設の改修工事により、マウス飼育数の制限が行われ、飼育費用が予定よりも少なかった。2022年度は、マウス飼育数を増やすため、2021年度未使用分を2022年度のマウス飼育費用および遺伝子シークエンス費用として使用する予定である。
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