| 研究実績の概要 |
前年度(令和2~3年度)までの研究内容として
①HCC細胞株に対してlenvatinib,sorafenibの耐性細胞を作成した。②作成した耐性細胞におけるCSCs集団の変化として、sorafenib耐性細胞は親細胞に比べてCD44high/CD133high細胞が増加したが、lenvatinib耐性細胞では逆に減少していた。③作成したsorafenib,lenvatinib耐性細胞,親細胞の3種類をヌードマウスの皮下に移植し、腫瘍形成能を比較検討したがいずれも親細胞に比較して優れた腫瘍形成能を有していたものの耐性細胞間では腫瘍形成能に有意な差は認められなかった。さらに、耐性細胞株と親細胞株をヌードマウスの皮下に移植後、実際にlenvatinib,sorafenibを経口投与し、薬剤投与量の最適化とin vivoレベルでの耐性について確認検討した結果、想定通り耐性細胞株ではinvivoにおいても薬剤耐性が確認できた。④作成した耐性細胞における遺伝子発現の変化をDNAマイクロアレイにより検討し、耐性細胞に共通する候補遺伝子Aの恒常的過剰発現・ノックダウン細胞を作成し、耐性への影響をin vitroで検討した。その結果、候補遺伝子Aはlenvatinib,sorafenib耐性に関与するがその寄与は限定的であることが示唆された。⑤候補遺伝子と薬剤耐性・CSCsに関わる遺伝子の発現のHCC検体での相関解析をTCGAデータを用いて行った。その結果複数の候補遺伝子において、耐性細胞株での結果と類似する結果が得られた。今年度は⑥3次元培養での各種検討、他の候補遺伝子の耐性への影響を検討した。候補遺伝子に関しては3次元培養でも2次元と同様の結果となった。またlenvatinib耐性に関しては、候補遺伝子Aに加えて候補遺伝子B,Cも協調して耐性に関与する可能性が示唆された。
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