研究課題/領域番号 |
20K17306
|
研究機関 | 山形大学 |
研究代表者 |
荒木 勇太 山形大学, 医学部, 助教 (30637228)
|
研究期間 (年度) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
キーワード | SASH1 / 遺伝性色素異常症 / モデルマウス / 機能解析 / CRISPR/Cas9 / ロドデノール |
研究実績の概要 |
昨年度に引き続きマウスを使った実験を継続した。研究実験計画に掲げた項目について経過を報告する。 ①その後もSASH1ヘテロ・ホモマウスの自然経過を確認したが、肉眼的にヒト患者と同様の色素斑は確認できなかった。しかし、ダーモスコピーで確認すると、毛孔周囲の色素斑の面積は不均一で、やはりばらつきも確認された。 ②紫外線照射の追加実験を行ったが、色素斑の増強は確認できなかった。 ③抗Melan-A抗体を使用した免疫蛍光染色において、モデルマウスでは、対照マウスより、メラノサイトから延びる樹状突起が少なく、毛包周囲のメラノサイト数にばらつきがあるようだった。メラノサイトのばらつきを把握するため、30%ロドデノールをマウスに塗布し、色素再生の様子を観察した。本年度使用できたマウスは、SASH1ヘテロと対照マウスのみで、ロドデノールへの反応が弱かったが、塗布を継続することで脱色素斑が誘発された。塗布を中止すると、毛孔周囲から徐々に点状の色素再生が確認された。組織を採取し、抗Melan-A抗体で染色すると、SASH1ヘテロマウスでは、対照マウスに比べて、毛孔周囲のメラノサイト数が多く、色素再生に伴い、その数はさらに増えていく傾向にあった。 ④メラニン合成や細胞接着に関わる分子の発現で有意な変化を示すものは確認できなかった。
|
現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
モデルマウスの作製がおおむね順調に進んでおり、研究実施計画で予定していた各種実験を一通り行えた。しかし、マウスの供給がまだ不安定(ヘテロ・ホモ接合体の偏りや、マウスの皮膚色、hairlessの個体差が大きい)であるため、実験のn数を増やすためにも交配を継続していく必要がある。
|
今後の研究の推進方策 |
マウスの交配を継続しながら、今年度に得られたデータをまとめつつ、次年度も実験を継続する予定である。特に、SASH1ヘテロノックアウトマウスの交配を進め、SASH1ホモ・ヘテロマウスで行ったような実験を次年度に行いたい。 研究実施計画②では、SASH1ヘテロノックアウトマウスを使用した照射実験を検討している。 研究実施計画③について、ロドデノール塗布マウスを使用した実験を進め、抗Melan-A抗体陽性細胞・樹状突起の不均一をさらに検証したい。 研究実施計画④について、SASH1遺伝子変異による各細胞の機能変化を捉えるため、マウスの皮膚全体のRNA解析ではなく、メラノサイトやケラチノサイトなど、各細胞毎に分子の発現を検証できないか検討中である。採取したマウスの皮膚から、各種細胞の分離培養を試みたい。
|
次年度使用額が生じた理由 |
次年度以降は、マウスの交配・維持・タイピング、免疫染色などに使用する各種抗体、細胞培養に関連する器材、RNA sequence、各種実験に使用するプラスチック器具、論文作成などに助成金を使用する予定である。
|