| 研究実績の概要 |
CNPの転写調節機構の解明のため、CNPのフィードバック機構の解明を目的としてin vitro, in vivoでCNPの投与／添加実験を行った。この実験により、CNPは生体内の軟骨組織でのみ負のフィードバック作用を持つが、その他のCNP産生臓器ではフィードバックがないこと、細胞レベルでは軟骨細胞でもフィードバックが起こらず、このフィードバック作用には軟骨以外の組織が関与していること、さらに生体内の血中CNPには軟骨由来のものが少ないためNT-proCNPの血中度濃度はCNPの投与によりほとんど変わらないことを見出し報告した(Ueda et.al. PLoS One. 2020 Oct 1;15(10):e0240023.)。
また、CNPの転写調節領域、転写因子の特定のため、CNPのプロモーター領域をクローニングしたルシフェラーゼベクターを使用し、軟骨細胞においてCNPの転写調節を行っている部位を特定した。配列から考えらえる転写因子のノックダウンにより転写調節の変化を確認したが、CNPの転写調節を変化させる転写因子は発見できなかった。また、グルココルチコイドが軟骨細胞においてCNPの転写を抑制することを利用し、上記のルシフェラーゼベクターでCNPの転写抑制に働く領域の特定を試みたが、グルココルチコイドによるルシフェラーゼ活性の低下は見られなかった。軟骨細胞におけるCNPの転写調節はepigenomicに調節されている可能性を考え、CNPの転写活性が低い未分化軟骨細胞とCNPの転写活性が高い分化軟骨細胞においてCNPプロモーター領域のメチル化、ヒストンのアセチル化をそれぞれbisulfite sequence、ChIP qPCRにより解析したが、いずれも未分化軟骨細胞、分化軟骨細胞において有意な差を認めなかった。
|
